衣原体鸡胚培养卵黄囊接种无菌操作与废弃胚处理安全操作规范.docVIP

衣原体鸡胚培养卵黄囊接种无菌操作与废弃胚处理安全操作规范

一、鸡胚培养前的准备工作

（一）实验环境的无菌处理

衣原体鸡胚培养对实验环境的无菌要求极高，需在百级生物安全柜内进行操作。操作前30分钟，开启生物安全柜的紫外灯进行照射消毒，照射范围应覆盖整个操作区域，包括工作台面、侧壁及内部设备。同时，对生物安全柜内部进行75%酒精擦拭，从清洁区向污染区单向擦拭，避免交叉污染。操作间的地面、墙面需用含氯消毒剂（有效氯浓度为500mg/L）进行喷雾消毒，消毒后密闭30分钟再通风换气。

实验人员进入操作间前，需更换无菌工作服、帽子、口罩及鞋套，并用75%酒精对手部进行消毒，待酒精挥发后方可进入。操作过程中，严禁随意出入操作间，如需传递物品，需通过传递窗进行，并对传递窗进行同步消毒。

（二）实验材料的准备与灭菌

鸡胚的选择与预处理：选择9-11日龄的SPF（无特定病原体）鸡胚，鸡胚应来自正规的SPF鸡场，且胚龄准确、发育良好。接收鸡胚后，需在鸡胚卵壳上用记号笔标记气室位置，然后将鸡胚置于37℃、相对湿度为60%-70%的孵箱中预孵24小时，剔除发育不良或死亡的鸡胚。

实验器械的灭菌：接种所需的器械，如注射器、针头、镊子、剪刀等，需先进行清洗，去除表面的污渍和杂质，然后用牛皮纸包裹，置于高压蒸汽灭菌器中，在121℃、0.1MPa的条件下灭菌20分钟。灭菌后的器械需烘干或自然晾干，存放于无菌