拟南芥钙依赖蛋白激酶单磷酸化位点突变双分子荧光互补载体的构建.docx

拟南芥钙依赖蛋白激酶单磷酸化位点突变双分子荧光互补载体的构建

摘要：将含有pGADT7-CPK4重组载体的E.coliDH5α菌液进行质粒提取,作为后续实验的基因模板。首先，要得到点突变的目的片段，主要是利用设计好的突变引物，通过三轮PCR反应获取。接着，将突变片段CPK4(N3)进行电泳和胶回收，对目的片段和双分子荧光互补实验空载体pSPYCE分别进行双酶切。之后，再用T4连接酶连接、转化，并将其涂布于含有卡那抗性的LB培养基中,过夜培养之后挑选阳性单克隆。最后，进行菌落PCR、酶切鉴定和测序。测

序结果表明：成功构建了拟南芥钙依赖蛋白激酶单磷酸化位点突变双分子荧光互补载体pSPYC