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探秘rPA（K）及其突变体表达系统：构建、优化与应用潜力挖掘

一、引言

1.1研究背景与目的

在当今医疗领域，血栓性疾病严重威胁人类健康，如心肌梗死、脑卒中等，每年都导致大量患者死亡或残疾。组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）作为一种重要的溶栓药物，在溶解纤维蛋白、治疗血栓性疾病方面发挥着关键作用。然而，t-PA存在体内半衰期短（仅3-5min）的问题，临床治疗时所需剂量高达50-100mg，大剂量使用不仅使患者经济负担沉重，还会引发颅内出血、周身纤溶性出血倾向等副作用。

基于对t-PA分子结构与功能的深入研究，人们通过基因工程技术对t-PA分子进行改造，以期望获得半衰期延长且纤溶活性增强的新型溶栓药物。rPA（K）作为t-PA的缺失、点突变体，具有独特的优势，它的分子量减少至43kD，同时去除了PAI-1（纤溶酶原激活剂抑制物-1）的结合位点，溶栓效率得到较大提高，半衰期得以延长。

本研究旨在构建并深入研究rPA（K）及其突变体的表达系统。通过建立高效的表达体系，实现rPA（K）及其突变体的大量表达和有效分离纯化，为后续的功能研究和临床应用奠定基础。同时，对其表达系统进行优化和完善，解决现有表达体系中存在的问题，如原核表达中目的蛋白以无活性包涵体形式存在、真核表达中糖基化位点影响产物活性等，从而提高rPA（K）及其突变体的生产效率和质量