高效构建cDNA与基因组DNA文库技术探讨.pptVIP

第九章?;基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体；cDNA文库是指含有所有重组cDNA的克隆群体。

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基因组文库：起源于基因组DNA，反应基因组的全部信息，用于基因组物理图谱的构建，基因组序列分析，基因在染色体上的定位，基因组中基因的结构和组织形式等。

cDNA文库：起源于细胞表示出的RNA，反应基因组表示的基因序列信息，用于研究特定细胞中基因的表示状态和表示基因的功效等。?

基因文库＝基因组文库＋cDNA文库

;一、载体的种类和特征：;二、cDNA文库的构建;;1：反转录酶催化合成cDNA第一链

;1.3.大规模和小规模反应管都在37℃温育1h。

1.4.温育接近结束时，在含有同位素的小规模反应管中加入1μl?0.25mol/L?EDTA，然后将反应管转移到冰上。大规模反应管则在70℃温育10?min，然后转移至冰上。

1.5.测定0.5μl小规模反应物中放射性总活度和可被三氯乙酸（TCA）沉淀的放射性活度。另外，用合适的DNA分子质量参照物通过碱性琼脂糖凝胶电泳对小规模反应产物进行分析是值得的。

1.6.按下述方法计算cDNA第一链的合成量

[掺入的活度值(cpm)/总活度值]×66(μg)=合成的cDNA第一链(μg)

1.7.尽可能快地进行cDNA合成的下一环节。

;2：cDNA第二链