CRISPRi技术调控大肠杆菌代谢通量研究结题报告.docVIP

CRISPRi技术调控大肠杆菌代谢通量研究结题报告

一、研究背景与意义

大肠杆菌（Escherichiacoli）作为合成生物学领域的模式菌株，因其遗传背景清晰、培养成本低廉、生长速度快等优势，被广泛应用于重组蛋白表达、生物燃料合成及高附加值化学品生产。然而，大肠杆菌固有的代谢网络存在通量分布不均衡的问题，导致目标产物合成效率低下，副产物积累过多，严重制约了其工业化应用潜力。传统的代谢工程策略，如基因敲除、过表达等，往往会对细胞生长造成不可逆的损伤，甚至引发代谢网络的代偿性重构，难以实现对代谢通量的精准、动态调控。

成簇规律间隔短回文重复序列干扰（CRISPRinterference,CRISPRi）技术是基于CRISPR-Cas系统发展而来的基因表达调控工具，通过失活Cas蛋白的核酸酶活性，使其仅能结合靶标DNA序列而不进行切割，从而在转录水平抑制基因表达。与传统方法相比，CRISPRi具有操作简便、特异性高、可同时调控多个基因、可逆性强等显著优势，为实现代谢通量的精细调控提供了全新的技术手段。本研究旨在利用CRISPRi技术对大肠杆菌的关键代谢节点进行精准调控，打破其固有代谢平衡，引导代谢通量向目标产物合成路径倾斜，为构建高效的大肠杆菌细胞工厂提供理论依据和技术支撑。

二、研究内容与方法

（一）CRISPRi调控系统的构建

载体选择与改造：本研究选用pCas9和pTarg