血管内皮祖细胞(EPC)与自体骨髓干细胞移植.pptVIP

鼠ESC在饲养层上能保持未分化状态,细胞团形态呈鸟巢样,边缘清晰,单个细胞体积小,折光性强,核质比高,集落大小不等,与索条状的MEF分界清晰,未见分化细胞脱离饲养层细胞后,在LIF的作用下,集落周边可出现扁平的细胞突起,呈现出轻微的分化状态×200×200碱性磷酸酶检测:鼠ES细胞集落全部红染，为碱性磷酸酶染色阳性（×100)Oct-4:×200SSEA-1×200悬浮培养法：以0.25%的胰酶/EDTA消化接近完全融合的鼠ESC，离心去上清，重悬计数。将细胞悬液按不同的密度接种至低粘附的培养皿中，采用不同的培养基培养，观察细胞形成悬浮的球形细胞团，即拟胚体（embryoidbody，EB)的数量及生长状态。Day2Day9Day4Day12×200第一步：EB形成：采用悬浮培养法第二步：EB的直接种植培养：取培养第4天的EB悬液，按50-100μl/孔用量移入0.1%明胶预衬的6孔培养板中，以分化培养基培养，每1-2天换液一次，换液时以PBS或Hanks液洗去未贴壁细胞。待细胞至70%-80%融合时，进行消化传代，即为ESC-ECP1。一般5-7天传代一次，多余细胞冻存。将Day4的EB直接种植,采用分化培养基培养,6小时内即贴壁生长,24h后可见从贴壁生长的EB周围出芽样长出梭形或