（2026版）基于NGS的肿瘤全景变异检测探针设计专家共识核心要点.pptxVIP

;;;;;;;目标区域选择策略（基因、热点、结构变异等）;;覆盖深度与冗余度设计考量;;测序读长匹配;杂交捕获与扩增子建库方法对探针长度、覆盖深度及特异性存在差异化需求，需根据检测目标（如SNV/CNV/融合）选择最优策略。杂交捕获探针设计要点：

探针长度建议80-120bp，覆盖目标区域外延20-50bp以提升断点检测灵敏度。

需结合μCaler?封阻序列优化杂交条件，降低非特异性结合（如Illumina平台中靶率提升20%以上）。扩增子探针设计要点：

多重PCR引物需避开SNP位点及同源区域，引物Tm值差异控制在±2℃内。

扩增子长度≤150bp时可适配MGI平台低重复率优势，但需验证扩增偏倚对低频变异检测的影响。;高GC/重复区域探针设计优化策略;;生信分析流程标准化建议;组织样本标准;特异性、阳性预测值（PPV）与阴性预测值（NPV）要求;;;;文库构建与捕获过程质控标准;性能验证（湿实验与干实验）方案与阈值;;临床样本验证方案设计要点;;明确标注NGS短读长技术对特定变异（如长片段插入缺失、复杂重排、高GC区域）的检测盲区，建议必要时补充长读长测序或Sanger验证。;;适应症范围（诊断、分型、预后、用药指导、监测）;;;;;;标准化与规范化建设的持续需求;