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湖南师范大学生命科学学院第13讲cD基因工程第三章目的基因的制备与鉴定湖南师范大学生命科学学院袁婺洲3.1从获取目的基因3.2PCR技术获取与扩增目的基因3.3从基因组数据库获取目的基因3.4通过蛋白质工程改建目的基因3.5转化体中目的基因的鉴定本章目录第一节从获取目的基因基cD(genelibrary)或D（(DNAlibrary)）是指在细菌中增殖来自某一生物的染色体DNA或cDNA所形成的全部DNA片段克隆的集合体。二、cD的构建以生物细胞的总mRNA为模板，用逆转录酶合成互补的双链cDNA，然后连接到载体上，转化宿主细胞后构建的，就是cD。1、从总RNA中分离mRNA2、cDNA第一链的合成多聚T引物法：cDNA5端可能部分不完整cDNA第一链的合成方法mRNAcDNA第一链随机引物退火逆转录酶dNTPs随机引物法：cDNA5端3端可能不完整3.cDNA第二链的合成（1）自身引导法：获得的双链cDNA5’端会有几对碱基缺失AAAAAAAAAAAAAAOH3’煮沸NaOHAAAAAAAAAAAAAA5′pppG