高效液相色谱实验36746.docVIP

一、实验目的

1、了解HPLC的结构和流程及操作方法；

2、了解流动相的制备和样品溶液的制备；

3、掌握该仪器的运行程序和具体操作内容；

4、学会用HPLC对样品进行分析，并从图谱中获得有用数据。

二、实验原理

高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。

三、仪器和试剂

1、仪器：美国安捷伦1200型HPLC一台（如图一）、

50μL的微量注射器一个

图一、常见的HPLC图

试剂：磷酸乙腈溶液(PH=3)、重蒸水、邻氯苯甲酸

四、实验步骤

1、流动相的准备

流动相只有一组：PH=3的磷酸乙腈溶液，进过脱气，用蠕动泵输送。

2、样品溶液的准备

配置好邻氯苯甲酸溶液，按要求选好滤纸的孔径大小。用低压过滤装置过滤，由于美国安捷伦1200型HPLC配有脱气装置，因此滤液无需事先脱气就可以进行分析。

3、开机

当2完成后，开机，待色谱柱平衡。

4、基线的查看

由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动，因此，需