从僵死家蚕中分离的高毒力Bt菌株W015-1的特征及其VIP

基因组学与应用生物学( 网络版), 2011 年, 第 30 卷 Genomics and Applied Biology (Online), 2011, Vol.30 研究报告 A Letter 从僵死家蚕中分离的高毒力 Bt 菌株 W015-1 的特征及其 cry1Ac22 基因鉴定 谢柳 1,2* 张文飞 1,2* 刘卓明 1,2 蔡玉根 4 李有志 1 方宣钧 1,2,3 1 广西大学生命科学与技术学院, 南宁, 530005 2 海南省农作物分子育种重点实验室, 三亚, 572025 3 海南省热带农业资源研究所, 三亚, 572025 4 浙江嘉兴市蚕种场, 嘉兴, 314000 * 同等贡献作者 通讯作者: xuanjunfang@; 作者 基因组学与应用生物学, 2011 年, 第 30 卷, 第 4 篇 DOI: 10.5376/.2011.30.0004 收稿日期：2011 年 1 月 8 日 接受日期：2011 年 1 月 18 日 发表日期：2011 年 1 月 30 日 这是一篇开放阅取的论文，其论文发布和传播接受《Creative Commons Attribution License》所有条款。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人 允许和同意第三方无条件的使用、传播以及任何媒介的复制或再制作。 本文首次以英文发表在开放取阅期刊《Bt Research》上，现依据版权所有人授权的许可协议，采用《Creative Commons Attribution License》用中 文再次发表与传播。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。如果读者对中文含义有歧义的话，请以英文 原文为准。我们建议您用以下格式引用： Xie et al., 2010, Characterization of a new highly toxic isolate of Bacillus thuringiensis from the Diapausing Larvae of silkworm and identification of cry1A22 gene, Bt Research Vol 1 No 1 (DOI: 10.5376/bt.2010.01.0001) 摘 要 我们从浙江省杭嘉湖地区收集了 100 份滞育僵死家蚕的幼蚕，解剖这些僵死的幼蚕的肠道，从中肠中分离出 240 份芽孢杆菌，从中鉴定出 6 株苏云金芽孢杆菌。经过小菜蛾生物测定获得一株高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bt)菌株 W015-1， 菌株编号015 。扫描电镜观察显示该菌株在形成芽孢的同时高产菱形晶体蛋白，SDS分析表明，该蛋白约 为 130 kD 的杀虫晶体蛋白。本研究采用脉冲场电泳(pulsed field gel elecctrophoresis, PFGE)用来分析 Bt 菌株 W015-1 的大质 粒，结果表明 Bt W015-1 的大质粒的数量、大小及带型谱和Bt 模式菌株 HD73 的几乎没有差异，但与HD1 和 Bti 则有明显 的不同。采取了 PCR-RFLP 方法鉴定 W015-1 菌株的 cry 基因型，结果显示与标准菌株 HD73 的 cry1Ac 基因型有明显的酶 切位点的差异。采用PCR-RFLP 结合反向PCR 方法克隆了编码该杀虫晶体蛋白的基因。序列分析表明该基因编码序列为3 537 bp， 编码 1 178个氨基酸残基的蛋白质(accession number EU282379) 。和已经克隆的cry1Ac1 基因氨基酸序列相似性最高，在233 (T/R)、 448 (M/I)和 1158 (K/E)3 个位点和 cry1AC1 不同，该cry1Ac 基因已经被Bacillus thuringiensis 毒素命名委员会正式命名为cry1Ac22 。 将 cry1Ac22 基因编码序列克隆到表达载体 pQE30 ，转入大肠杆菌M15 中能表达 130 kD 的蛋白，表达蛋白进行生物测定表 明Cry1Ac22 蛋白对鳞翅目昆虫小菜蛾(Plutella xylostella)很高的杀虫活性。鉴于 Bt W015-1 在质粒谱、cry 基因酶切位点、 毒性蛋白产量及对鳞翅目的杀虫活性等