高效液相色谱-串联质谱联用测定富含淀粉食品中丙烯酰胺.pdfVIP

维普资讯 第34卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 特刊 2006年 9月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry $235一S238 高效液相色谱一串联质谱联用测定富含淀粉食品中丙烯酰胺 刘红河 陈春晓 柳其芳 刘小立 尹江伟 (深圳市疾病预防控制中心，深圳 518020) (深圳市宝安区疾病预防控制中心，深圳518100) 摘 要 以甲基丙烯酰胺作为内标物， 高效液相色谱／串联质谱 (HPLC／MS／MS)法测定食品中的丙烯酰 胺。均质后的食品样品，加入正己烷经液一液分配去除脂肪，用蒸馏水提取丙烯酰胺，Carrez试剂净化提取样 品，净化液经离心后过0．45 m微孔滤膜，采用HPLC／MS／MS电喷雾电离(ESI)，阳离子，多反应监测(MRM) 模式检测，外标法定量。方法的线性范围为2—500 g／L，线性相关系数为0．9997，检出限为2Ixg／kg；高中低 3个水平的加标回收率分别为99．4％、99．6％和98．4％；相对标准偏差(RSD)均小于7。8％。 关键词 高效液相色谱／串联质谱，丙烯酰胺，食品分析 1 引 言 丙烯酰胺(acrylamide)，结构式CH：一cH—cONH ，是一种水溶性小分子白色结晶状固体，巳被国 际癌症研究中心(IRAC)列为 ⅡA类致癌物 ¨j。2002年首次在食品中发现高含量的丙烯酰胺 ，即引 起世界卫生组织等国际机构高度重视。食物为人类丙烯酰胺的主要来源，丙烯酰胺在食品中的产生机 理，是由食品中天门冬酰胺和还原性糖在高温加热过程中通过美拉德反应 (Maillardreaction)而生 成 。目前，国际上食品中丙烯酰胺测定方法主要为采用同相萃取柱净化样品，以¨c标记丙烯酰胺 作为内标物的同位素稀释气相色谱一质谱联用法 (GC—MS)和高效液相色谱一质谱联用法 (HPLC— Ms) 。但这些方法仅可以满足单个实验室内的确证和检验要求，还没有一种方法通过多个实验室 间的协同确认。我国目前也有这方面的报道 j，但基本为国外测定方法的重复。同位素标记内标物 较难获得，且价格昂贵；固相萃取处理样品待测成分损失大，回收率低。本研究在总结国际上先进方法 的基础上，建立了食品中痕量丙烯酰胺的高效液相色谱一串联质谱测定法 (HPLC／MS／MS)，采用与丙烯 酰胺理化性质类似的甲基丙烯酰胺作为内标物，用化学净化法(carrez试剂)对样品进行净化，该法操作 简便 、快速、准确，灵敏度优于现有文献报道，适合批量检测。 2 实验部分 2．1 仪器与试剂 1100液相色谱仪 (美国Agilent公司)，配二极管阵列检测器；API3000串联=三：级四极杆质谱仪 (美 国应用生物系统公司)，配有Turbo．Ionspray源 、针泵以及Analyst1．4数据处理系统；气源为高纯氮气； 色谱柱：PinnacleⅡC 2．1mm×150mm×5．0Izm(美国Restek公司)；Allegra64R高速冷冻离心机 (美国BeckmanCoulter公司)；固相萃取柱：OasisHLB，6mL，200mg(美国Waters公司)；0．45 m水系 针筒式微孔滤膜过滤器。 丙烯酰胺 、甲基丙烯酰胺，纯度99％(美国Sigma公司)；丙烯酰胺储备液浓度为 1000ms／I甲醇 溶液，存放于一20cI=冰箱中；丙烯酰胺标准应用液浓度为 1．0mg／L的水溶液 (临用新配)。CarrezI试 剂：称取 15gK4[Fe(CN)]·3HO溶于 100mL水中；Ca~ezⅡ试剂：称取30gZnSO ·7HO溶于 100mL水中。试剂除注明外均为色谱纯。实验用水为二次蒸馏超纯水。氮气(纯度大于99．999％)。 2．2 LC／Ms／MS分析条件 液相色谱条件：流动相为甲醇．水 (5：95，V／V)，含0．01％的 氟乙酸；流速 0．15111L／rain；柱温 25~C；波长扫描范围190—370nm，DAD检测波长206nm；进样体积：20 L。 质谱条件：离子源为ESI(+)，检测方式为多反应监测(MultipleReactionMonitor，MRM)方式，利用 2005—11-06收稿 ；2o06 3—22接受 本文系广东省医学科学技术研究基金资助项 目(No．A2004621)