不同渗调剂处理对老化茎瘤芥种子中淀粉酶活性的影响.docVIP

【标题】不同渗调剂处理对老化茎瘤芥种子中淀粉酶活性的影响 【作者】朱在强 【关键词】渗调剂??老化茎瘤芥种子??淀粉酶活性 【指导老师】王慧超 【专业】生物科学 【正文】1?引言1.1研究背景及意义茎瘤芥最初由野生芥菜进化而来，其进化次序是野生芥菜—大叶芥菜--笋子芥--茎瘤芥。茎瘤芥属十字花科,俗名青菜头，它是茎瘤芥属茎用芥菜，芥菜的一个变种，且种子籽粒小。属常异花授粉作物，种子容易老化，保证种子纯度难度大，会引起榨菜早花早苔、茭白茎、瘤茎空心率增加，导致产量低、品质差,品种老化，种子生产力大幅度下降，直接影响产量和质量。因此在采种技术上除了与其它十字花科蔬菜作物共有的要求之外,还必须注重四方面的技术环节:一是根据加工方法和购买确定品种；二是控制块茎过分膨大，以防后期早衰；三是适时收种，防止落粒影响产量；四是避免烈日曝晒，影响种子质量。[1]茎瘤芥种子寿命很短，在以后随着贮藏时间的延长，淀粉酶活性也逐渐降低直到活性完全丧失。[2]实验表明，在种子老化衰老过程中，细胞膜结构和功能受损，会引起选择性渗透能力的降低，导致吸胀过程中细胞内物质的外渗，其结果是使种子本身的生理失调，并有利于种子周围病菌的侵染繁殖，从而降低种子出苗率。正常种子的膜系统是在酶促催化下促使细胞膜不断更新和修复。并且清除由于磷脂中不饱和脂肪酸自身氧化产生的有毒物质。当种子处于自然老化条件下，酶的活性降低，更新修复作用脆弱。因而造成累积性伤害，导致膜的损伤，从而给农业生产和种子资源的保存造成不同程度的损失。种子成熟度、采种技术、贮藏条件不同造成种子质量低劣。在其发芽过程中，发芽率是相当的低。而萌发初期起作用的又以淀粉酶为主,淀粉酶活性是导致种子快速发芽的主要原因，几乎所有种子中都存在淀粉酶，尤其是萌发的种子，淀粉酶活性最强。可以采取播前预处理手段保持和提高种子的活力。[3]对于不同渗调剂处理而言，其作用原理和方式也各不相同，种子常用各种渗调剂处理，如聚乙二醇(PEG)?[4-6]、聚乙烯醇(PVA)?[7]、氯化钠（NaCl）[8]、2x10-4mol/L SA[9-10]、硝酸钾（KNO3）[11]渗凋处理后，通过调节种子的吸水过程，使种子本身的细胞膜得到充分的修复，使种子缓慢吸胀，有利于种子吸胀膜系统的修复，减少营养物质的外渗，其作用在于改变种子的渗透势、有效活性和去阻抑作用并增加淀粉酶的合成，能明显提高种子的活性。[12]影响种子活性的因素主要是种子形成及发育过程中所受的影响；种子成熟度与采收期的影响；采收处理过程的影响；微生物的侵染和害虫的伤害；贮藏过程、播前预处理等方面。这些环境因子错综复杂，它们以直接或间接的方式影响种子活力的变化，造成种子活力的差异。播前预处理恢复种子活力,则是提高种子活力的有效手段。然而老化的种子的发芽率和淀粉酶活力指数均有不同程度的下降，而用渗调剂进行引发处理后，其发芽率和淀粉酶活性指标均比未引发处理的明显提高。不同渗调剂的引发处理能提高种子的活力。有利于提前启动一些与萌发有关的生理生化过程；可以提高老化种子的发芽率和淀粉酶活性。茎瘤芥作为涪陵主要的特色农作物，经过加工与包装，产品已经畅销全国各地，对涪陵经济发展有重大的促进作用。因此，提高老化茎瘤芥种子的活力，对降低生产成本，提高效益意义深远。本研究旨在通过渗调剂处理老化茎瘤芥种子，来提高其中淀粉酶的活性，为阐明茎瘤芥种子老化的分子机制提供了理论依据。1.2?实验原理本研究的内容是测定不同渗调剂处理后老化茎瘤芥种子中淀粉酶活性的变化,[13]淀粉酶水解淀粉生成麦芽糖，麦芽糖可将3,5-二硝基水杨酸还原成红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，该物质在540nm波长处，有最大吸收值。因此本实验3,5-二硝基水杨酸法，以不同渗调剂处理后老化茎瘤芥种子的淀粉酶提取液水解淀粉，得到麦芽糖。麦芽糖可将3,5-二硝基水杨酸还原成红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，然后测定含红棕色3-氨基-5-硝基水杨酸反应液的吸光度值，通过查麦芽糖浓度标准曲线（用3,5-二硝基水杨酸法测出的仅是吸光度值，必须先用麦芽糖标准溶液绘制出麦芽糖浓度标准曲线，通过查麦芽糖浓度标准曲线即可计算出反应生成的麦芽糖含量）,得到反应液中的麦芽糖含量，从而计算出样品中淀粉酶的活性。2?材料与方法2.1?材料2.1.1?实验材料茎瘤芥种子(永安小叶，贮藏期为3年），由重庆涪陵绿原农业科技发展公司提供。2.1.2?主要仪器和设备表2-1?主要仪器和设备名称 型号 生产企业可见分光光度计 VIS-7220 北京瑞利分析仪器公司冷冻离心机 HITACH 日立公司电子分析天平 AR2140 上海市桂平路589号美菱冰箱 BCD-218 合肥美菱股份有限公司电热鼓风干燥箱 CS101