不同条件对茎瘤芥硝酸还原酶活性的影响.docVIP

【标题】不同条件对茎瘤芥硝酸还原酶活性的影响 【作者】周 巧 【关键词】硝酸还原酶? pH??温度??酶浓度??硝酸钾浓度??激活剂??抑制剂? 【指导老师】李 敏 【专业】生物科学 【正文】1?引言1.1研究目的和意义茎瘤芥在植物分类上定位为：双子叶植物纲，十字花科，芸苔属，芥菜种叶芥亚种，大叶芥变种的变种[1]。成熟的未抽穗以前的茎瘤芥，其地上部分高60至80cm，地下部分主根长20至30cm，整株一般重2至4公斤。地上部分的下部为肥大的瘤茎，茎上长着十余片大叶；大叶的叶柄基部长着瘤状的肉质茎，明显的瘤状凸起一般3到5个。瘤茎表皮青绿光滑，皮下肉质色白而肥厚，质地嫩脆。瘤茎部分，即青菜头，一般每个重0.5公斤左右，大者1至1.5公斤，是涪陵地区榨菜的重要原料作物，所以对它进行研究，有利于涪陵地区对地方性蔬菜茎瘤芥的利用。硝酸还原酶（nitrate reductase， EC.1.6.6.1，缩写NR）是氮代谢过程中一个重要的调节酶和限速酶[2]。在植物的根和叶中都有该酶的存在，它是一种可溶性的钼黄素蛋白，由黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）、细胞色素b557和钼等辅助因子组成[3]。硝酸还原酶(nitrate reductase，NR)是硝酸盐同化步骤中的第一个酶，也是整个同化过程的限速酶，在植物氮素代谢过程中起关键作用[4，5]。植物吸收利用环境中的硝酸盐，需经过两个同化反应步骤:首先由NR把硝酸盐还原为亚硝态氮(NO2-)，然后再由亚硝酸还原酶把NO2-还原为NH4+，才能进一步掺入氨基酸及蛋白质的合成[5]。蔬菜是人们必不可少的副食品之一，提供人们每日所需的各种维生素以及碳水化合物等营养物质[11]，但它同时也是一种富氮、喜硝的作物。人体摄入的硝酸盐有80%来自于蔬菜，植物食品是人体吸收硝酸盐的首要来源[12]。膳食中硝酸盐本身对人体无害，绝大部分亚硝酸盐在人体内以“过客”的形式随尿液排出?，过量摄取硝态氮易引起高铁血红蛋白症，进入人体后的硝酸盐可被微生物还原成有毒的亚硝酸盐，亚硝酸还可与次级胺结合成强致癌物亚硝胺，从而诱发食道癌、胃癌、肝癌等[13]。蔬菜的生产是一个物质转化的过程，人们为了在单位面积土地上达到高产的目的，而超施氮肥，造成蔬菜品质的恶化，硝酸盐的积累量上升。因此，硝酸盐在植物体内积累过多已成为影响蔬菜品质并危害人类健康的重要因素，硝酸还原酶（NR）是硝酸盐代谢中的关键酶，硝酸盐被植物体吸收后，首先会被存在于根中或叶肉细胞细胞质中的硝酸还原酶还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐被迅速运进质体，在质体中被亚硝酸还原酶还原为NH4+后，才能被植物体利用，因而提高硝酸还原酶活性有利于硝酸盐的降解[14]，从而达到降低蔬菜中硝酸盐含量、增加蔬菜的产量和蔬菜的品质。目前，对于硝酸还原酶的研究很多，大多数是对于粮食农作物，蔬菜中硝酸还原酶的研究也不少，而对于茎瘤芥这种地方性的品种，其硝酸还原酶活性研究未见报道。陈建平等人的研究表明：不同品种NR活性有差异显著。还有研究表明，硝酸还原酶对于环境条件十分敏感，如硝酸盐浓度、温度、pH值、光照等均会影响其活性。所以，本文通过不同的温度、pH值、酶液浓度、底物浓度、激活剂和抑制剂对硝酸还原酶活性的影响进行研究，以便找出硝酸还原酶最大活性时的最适条件，旨在利用最佳条件最大限度提高茎瘤芥中硝酸还原酶的活性从而降低其体内的硝酸盐累积量，进而为人们能够放心食用以茎瘤芥为原料加工形成的各种食品以及提高茎瘤芥产量和品质提供科学依据。1.2?国内外研究现状硝酸还原酶（nitrate reductase，NR）是植物体内诱导酶之一，是植物氮素代谢生理的关键酶[11]。它对植物的生长发育、品质、产量形成和蛋白质含量都有重要的影响[15]，很早就引起植物生理学和农学工作者的极大重视。硝酸还原酶作为氮代谢过程中一个重要的调节酶和限速酶[2]。国外在60年代就开始了硝酸还原酶的研究，1973年美国的Hageman研究证明硝酸还原酶的活力可以作为籽粒产量和蛋白质含量的生化指标[16]。目前，国外对硝酸还原酶的研究主要集中于对木本植物的研究，如硝酸还原酶与树木的生长、与树木氮肥的利用等。除此之外?，1969?年Eppley?还首次将硝酸还原酶应用到海洋生态学研究中[17]。在植物NR活性与蛋白质含量的关系方面，国内外学者进行过许多研究[6]。李豪哲[7]等提出把大豆叶片NR活性作为蛋白质育种的生化指标。Hageman[8]等以玉米为材料研究表明，叶片NR活力与蛋白质含量之间存在显著的正向相关性，也主张将NR活力作为蛋白质含量的生化指标。许多学者报道了燕麦、南瓜和大麦等植物的蛋白质含量和NR活性通常具有重要的相关性[6]。陈煜等的研究也显示，NR活性与蛋白质含量呈极显著正相关，与