发芽蚕豆β淀粉酶的提取研究.doc

【标题】发芽蚕豆β-淀粉酶的提取研究 【作者】冉燕 【关键词】发芽蚕豆　　β-淀粉酶　　提取条件 【指导老师】王慧超 【专业】生物 【正文】1??引言?1.1?研究背景、目的和意义淀粉酶广泛存在于动植物及微生物中,按照其结构的差异分为α、β型两大类。β-淀粉酶又叫淀粉1，4-麦芽糖苷酶，系统名称α-1，4葡聚糖麦芽糖苷酶，此酶主要存在于高等植物特别是发芽种子中。β-淀粉酶是一种外切酶，作用于淀粉时，从淀粉链的非还原性末端开始，水解它的α-D-1，4-葡萄糖甘键，水解时沿着淀粉链每次水解掉两个葡萄糖单位，水解产物为麦芽糖。由于它只能从淀粉链的外部开始依次进行水解，故水解速度较慢，不能像α-淀粉酶那样使淀粉溶液黏度迅速降低。该酶不能水解也不绕过α-D-1，6-葡萄糖甘键，当它作用于支链淀粉时，遇到分支点即停止作用，剩下的大分子质量分支糊精，称为β-极糊精。β-淀粉酶在催化淀粉α-D-1，4-葡萄糖甘键水解的同时，使生成的游离半缩酸羟基发生转位，使产物由α型转变为β型，生成β-麦芽糖，酶名β-淀粉酶即由此而来［２］。β-淀粉酶是一种糖化酶，可作为糖化剂，应用于制备饴糖、啤酒、饮料等工业生产中。在结晶麦芽糖及麦芽糖醇时也需要较纯净的高活力的β-淀粉酶。因此β-淀粉酶的提取在食品、加工、发酵、纺织品、医药等行业有着重要的应用价值。??蚕豆又名胡豆、罗汉豆、佛豆，学名Vicia fabaL,豆科Leguminosae野豌豆属［３］。蚕豆的主要成分是淀粉，其含量高达45%-47%，蚕豆种子中蛋白质含量也高，平均达30%，是豆类中仅次于大豆的高蛋白作物。蚕豆可为保健食品等产业的开发利用提供淀粉和蛋白质作为食用成分。2004年，汪丹媚等人对蚕豆淀粉的性质作了研究［４］，但对于发芽蚕豆β-淀粉酶的提取还未见报道，所以，本实验就对发芽蚕豆β-淀粉酶的提取条件进行了初步研究。蚕豆种子中淀粉酶含量比较丰富，在未发芽蚕豆中仅含有β-淀粉酶，而萌发后的蚕豆种子中既含有β-淀粉酶，也含有α-淀粉酶。通过本研究得到从发芽蚕豆中提取β-淀粉酶的最佳提取工艺参数，为今后β-淀粉酶的进一步纯化和制剂的生产提供重要的依据，也为人们进一步对发芽蚕豆进行研究奠定基础。1.2?技术路线1g发芽蚕豆?+?一定量的还原剂?+ 5ml 1%?氯化钠?+?石英砂（少许）↓充分研磨置于离心管中30min,每隔2min搅动1次???????????????????????↓6000r/min离心10min↓定溶为50ml（酶原液）???????????????→??????取5ml定溶为50ml（稀释液）①↓????????????????????????????????????????????↓取1ml淀粉酶置于70℃水浴中15min????????????????????????取1ml淀粉酶???????????????????????↓（钝化β-淀粉酶）???????????????????????????↓（ 40℃保温10min?）加1ml 1%可溶性淀粉??????????????????????????????加1ml 1%可溶性淀粉??????????????????????↓（40℃保温5min）????????????????????????????↓（40℃保温5min）??????????????????????????????加2ml3，5-二硝基水杨酸??????????????????????????加2ml3，5-二硝基水杨酸????????????????????????↓?沸水浴中（5min）???????????????????????????↓(沸水浴中5min)冷却后，定溶为25ml???????????????????????????????冷却后，定溶为25ml↓?????????????????????????????????????????????↓541nm下测定吸光度值?????????????????????????????? 541nm下测定吸光度值??????????????????????????↓?????????????????????????????????????????????↓????????????计算α-淀粉酶的活力??????????????????????????????计算总淀粉酶的活力??????????????????????????????????????↓????????????????????β-淀粉酶的活力=总淀粉酶的活力-α-淀粉酶的活力??2??材料2.1?实验材料取一定量的蚕豆浸泡在40℃温