黄花蒿多酚氧化酶的动力学研究.doc

【标题】?黄花蒿多酚氧化酶的动力学研究 【作者】向亚琼 【关键词】?黄花蒿??多酚氧化酶??动力学 【指导老师】乔 辰 【专业】生物 【正文】1?引言黄花蒿（Artemisia annua L.），别名臭蒿、苦蒿。菊科，蒿属。一年生草本。全株黄绿色，有臭气。茎直立，高达0.5～1.5 m，多分枝，无毛。基部及下部叶在花期枯萎，中部叶卵形，三次羽状深裂，长4.5～7cm，宽约1.5～3 cm，裂片及小裂片锯圆形或倒卵形开展，顶端尖锐，基部裂片常抱茎，表面深绿色，背面色较浅，被短微毛；上部叶渐小，常一次羽状细裂。多数为头状花序，球形，直径约1.5 mm，具细软短梗，排成复总状或总状，常有条形苞叶，总苞无毛；总苞片2～3层，外层狭锯圆形，绿色，内层椭圆形，除中脉外边缘宽膜质；花托长圆形；花筒状，黄色，长不超过1 mm，外围是雌花，仅有雌蕊1枚，中间花为两性，花冠尖端5裂，雄蕊5枚，雌蕊1枚，雌花长约0.5 mm，两性花长约1 mm。花药先端尖尾状，基部圆钝；柱头2裂，裂片先端呈画笔状。瘦果矩圆形，长约0.7 mm，无毛。花期8～10月，果期10～11月。生长于路旁，山坡、林缘、荒地。产于全国各地[1,2]。中国传统医学中医认为黄花蒿具有清热凉血、退虚热、解暑、截疟的作用。主要用于治疗结核潮热、伤暑、低热无汗、疟疾及多种瘟病（发热性传热病）[3]。现代医学研究证实从黄花蒿中提取的有效成分——青蒿素及其衍生物是一种高效、速效、安全的抗疟新药，可用于凶险型疟疾的抢救和抗氯喹病例的治疗[4]。其中，衍生物蒿甲醚治疗恶性疟与间日疟的治愈率高达99%，双氢青蒿素的抗疟活性为青蒿素的10倍、青蒿琥酯的38倍，苯勿醇还是治疗白血病的特效药品[5]。除此之外，近年来世界医药界科技人员还发现利用青蒿素生产的系列产品对艾滋病（HIV）、埃博拉病、登革热、猩红热、血吸虫病、流感病毒高烧、癌症等疾病有显著疗效。青蒿素及其衍生物类药品用于非典治疗，也有显著的疗效[3]。青蒿素也是我国惟一进入美国药典（USP）重要天然药品，同时也是被世界卫生组织（WHO）推荐的首选基本目录的药物[5]。??疟疾是全球贫穷国家的头号杀手疾病，全球有6亿疟疾患者需要接受有效的紧急治疗。由于疟原虫对氯喹等传统抗疟药的耐受性日益增强，青蒿素目前已成为治疗疟疾的一线用药。世界卫生组织（WHO）估计，全球至少需要1亿支青蒿素制剂，但全球现有制剂仅有所需数量的三分之一[4]。因此青蒿素及其衍生物类药品供不应求，价格飞涨（青蒿素高达700万元/吨，其衍生物双氢、蒿甲醚等高达20000～80000元/kg）。但由于利益的驱使，有些种植户没有根据黄花蒿的生理生化特性来收割黄花蒿，如收割时间过早或收割后没有完全晒干，从而导致青蒿素含量下降或不能存放太长时间，给黄花蒿的加工和储藏带来了麻烦。因此，了解黄花蒿的基本生理生化特性，有利于黄花蒿的栽培、收割、加工和储藏。多酚氧化酶（polyphenol oxidase,?简称 PPO）的系统命名是邻二酚?：氧-氧化还原酶（EC 1.10.3.1），是以铜离子为辅基，以氧气为受氢体的一种末端氧化酶[6]。它是在细胞质中合成的，普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中[7]。在微生物中，PPO形成的黑色素能抗拒几丁分解酶和葡聚糖酶作用；在昆虫体内，PPO参与外骨骼的形成和伤口的愈合；在甲壳动物中具有凝血及防御功能；在哺乳动物中与保护色、防止辐射伤害有关；在人体内则催化黑色素的形成[8]。在植物组织中，PPO是与内囊体膜结合在一起的，天然状态无活性，但将组织匀浆或损伤后酶被激活。PPO在氧气存在的条件下，催化各种酚类使之氧化成醌，再进一步氧化聚合成黑色素[7]。黑色素可以使植物组织增加抵抗微生物侵染的能力；在红茶加工过程中，茶多酚物质在多酚氧化酶的催化下发生氧化聚合反应，生成的茶黄素、茶红素等氧化产物，才使茶叶形成红茶红叶红汤的特殊品质；但在各种食品和果蔬制品加工过程中，黑色素反而会影响到它的色泽和品质，在药品生产、加工过程中，黑色素物质在一定程度上也会影响药品的疗效。所以，黄花蒿作为最新型的抗疟药的提取原材料，了解其体内PPO的特性有助于黄花蒿的栽培、收割、储藏和加工，但有关黄花蒿PPO的研究至今未见报道。本文以黄花蒿为材料，对其体内PPO进行了研究，这不仅可以丰富黄花蒿的基础理论研究内容，而且对它的开发利用提供有价值的资料。2?材料、仪器与方法2.1?材料实验材料采自重庆市涪陵区江东郊区的野生黄花蒿（Artemisia annua L.），时间为2006年3～4月。2.2?药品与仪器邻苯二酚（CR），磷酸氢二钾、柠檬酸、硼酸、巴比妥、氢氧化钠、石英砂、活性炭，均为分析纯。VIS-7220型分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）