DNA重组技术的基本工具.ppt

准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） ——限制性核酸内切酶 DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ——DNA连接酶 基因转移工具（“分子运输车”） ——基因进入受体细胞的载体 这些生物为什么没有在长期的进化过程中由于外源DNA的入侵而灭绝，有什么保护机制？ 限制性内切酶作用过程 DNA连接酶的作用过程 限制性核酸内切酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 形成两种末端 基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 作为载体的条件： 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、种类： 2、作用部位： 两类 连接黏性末端 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 连接黏性末端和平末端 质粒 λ噬菌体衍生物 动植物病毒 天然质粒 人工改造 的 能自我复制；有切割位点； 有遗传标记基因；对受体细胞无害 基础上进行过 * 一、基因工程的概念： 基因工程，又叫DNA重组技术。是指按照人们的愿望，在DNA分子水平上进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 原理 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因重组 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的基因产物 回顾： 优点： 定向地改造生物的遗传性状； 实现基因在不同物种之间的转移，迅速培育出生物新品种 1．基因拼接的理论基础 (1)大多数生物的遗传物质是DNA。 (2)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。 (3)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。 一、基因工程诞生的理论基础 2．外源基因在受体内表达的理论基础 (1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。 (2)遗传信息的传递都遵循中心法则。 (3)生物界共用一套遗传密码。 DNA重组技术的基本工具 工欲善其事, 必先利其器. 想一想:获得转基因抗虫棉需要做哪些工作呢? 实现这一精确的操作过程的工具是什么呢? 二、DNA重组技术的基本工具　 限制性内切酶从哪里寻找？ （一） 限制性核酸内切酶 在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种 生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？ 1.限制性核酸内切酶——“分子手术刀” (1)来源: (2)化学本质： (3)作用 (4)作用特点： (5)切割方式 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并 且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸 二酯键断开。 错位切：产生两个相同的黏性末端 平切：形成平末端 特异性，即识别特定的脱氧核苷酸序列,切割特定位点。 主要从原核生物 蛋白质 点击播放 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A T C G A G A T C 限制酶切割磷酸二酯键 黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 EcoRI限制酶的切割： 中轴线 黏性末端 黏性末端 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 平末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 C C C G G G G G G C C C SmaI限制酶的切割： 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？ E·coliDNA连接酶与T4DNA连接