薄层色谱法.pdfVIP

附录Ⅴ B 薄层色谱法 薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图， 与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用于药品的鉴别或杂质检查的方 法。 1.仪器与材料 （1）薄层板 自制薄层板 除另有规定外，玻璃板要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾 干。最常用的固定相有硅胶 G、硅胶 GF254 、硅胶 H 和硅胶 HF254 ，其次有硅藻 土、硅藻土 G、氧化铝、氧化铝 G、微晶纤维素、微晶纤维素F254 等。其颗粒大 小，一般要求粒径为 5～40µm 。 薄层涂布，一般可分为无黏合剂和含黏合剂两种。前者系将固定相直接涂布 于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的黏合剂，一般常用 10%～15％煅石 膏（CaSO ·2H O 在 140℃加热 4 小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤 4 2 维素钠水溶液（0.2%～0.5 ％）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。使用涂布 器涂布应能使固定相在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 商品薄层板 分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶 GF254 薄层 板、聚酰胺薄膜和铝基片薄层板等。高效薄层板的粒径一般为 5~7µm 。 （2 ）点样器 同纸色谱法项下。 （3 ）展开容器 应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严 密的盖子，底部应平整光滑，或有双槽。 （4 ）显色剂 见各品种项下的规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或置适宜 试剂的蒸气中熏蒸显色，用以检出斑点。 （5 ）显色装置 喷雾显色要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸 渍显色可用专用玻璃器皿或用适宜的玻璃缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸 或适宜大小的干燥器代替。 （6 ）检视装置 为装有可见光、短波紫外光 （254nm ）、长波紫外光 （365nm ） 光源及相应滤片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱用，暗箱内光源应有足够的 1 光照度。 2.操作方法 （1）薄层板制备 自制薄层板除另有规定外，将１份固定相和 3 份水在研钵中按同一方向研磨 混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂 布（厚度为 0.2～0.3mm ），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干 后，在 110℃活化 30 分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀 度（可通过透射光和反射光检视）。 商品薄层板临用前一般应在 110℃活化 30 分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝 基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破 损。如在贮放期间被空气中杂质污染，使用前可用适宜的溶剂在展开容器中上行 展开预洗，110℃活化后，放干燥器中备用。 （2 ）点样 除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样 基线距底边 2.0cm，样点直径为2～4mm （高效薄层板为1～2mm ），点间距离可 视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为 1.0～2.0cm （高效薄层板可不小于 5mm ）。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。 （3 ）展开 展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂， 必要时在壁上贴两条与缸一样高的宽滤纸条，一端浸入展开剂中，密封顶盖，使 系统平衡或按各品种项下的规定操作。 将点好供试品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边 0.5～1.0cm （切勿将样点浸入展开剂中），密封顶盖，待展开至适宜的展距（如： 20cm 的薄层板，展距一般为 10～15cm，高效薄层板展距一般为 5 cm 左右），取 出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。 展开可以单向展开，即向一个方向进行；也可以进行双向展开，即先向一个 方向展开，取出，待展开剂完全挥发后，将薄层板转动 90 °，再用原展开剂或 另一种展开剂进行展开；亦可多次展开。 （4 ）显色与检视 荧光薄层板可用荧光猝灭法；普通薄层板，有色物质可 2 直接检视，无色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色 及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即