同济《核医学》05体外分析技术.ppt

体外分析技术 内容提要 Part one: 体外放射分析技术 Part two: 非放射免疫分析技术 Part three: 临床应用 体外分析技术 体外放射分析 非放射标记免疫分析 Definition 在体外条件下 In vitro 以放射性核素标记的配体为示踪剂 Tracer 以结合反应为基础 Base 以放射性测量为定量手段 Means 对微量物质进行定量分析 Quantitative analysis 一类分析方法的总称。 General name Main methods 放射免疫分析、免疫放射分析、放射受体分析、受体放射分析、蛋白质竞争结合分析等。 其中以放射免疫分析和免疫放射分析应用最为普遍。 不仅可用于样品中蛋白质、多肽、甾体类激素等物质的测量，而且可用于具有生物活性的小分子物质的检测，如血药浓度测定等。 分类 Competive binding analysis 放射免疫分析是体外放射分析最有代表性的一类检测技术。另外还有放射受体分析、蛋白质竞争结合分析、放射酶促分析等。 Non-competive binding analysis 免疫放射分析、受体放射分析是典型的非竞争性体外放射分析。此外。还有酶的放射化学测定、酶的激活剂或抑制剂测定法等。 Radioimmunoassay,RIA 放射免疫分析 Radioimmunoassay,RIA 是以抗原抗体的免疫反应为基础，利用待测抗原与定量的标记抗原同有限量的特异性抗体竞争性结合，以放射性测量为微量定量手段，获得待测生物样品中抗原浓度的技术。 抗原与相应的特异性抗体在适当条件的反应体系中能够产生结合反应，形成抗原抗体复合物。 标记抗原的引入 为了定量地测定待测样品中抗原的含量，如在这个体系中加入放射性核素标记的同类抗原，体系中同时存在两个平衡。 Ag＋Ab Ag.Ab ＋ Ag* Ag*.Ab Ag＋Ab Ag.Ab ＋ Ag* Ag*.Ab Ag*与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争性与Ab结合， 当Ag*和Ab的量保持恒定，Ag*与Ag之和大于Ab时，则Ag*.Ab复合物的形成受Ag含量的制约，二者之间存在函数关系，即随着Ag浓度的增加，Ag*.Ab复合物也减少，因为Ag*对Ab的结合被Ag竞争性抑制。 Competive inhibition curve Ag*与Ag的免疫化学性质相同； Ag*与Ag之和大于Ab，Ag*与Ab的量保持恒定。 Standard curve 如果采用系列已知浓度的标准品在相同条件下进行分析，测得各标准点的结合率(B/F)，以结合率对标准品量作图，可以得到一条标准曲线。通过这条标准曲线即可查得未知浓度的待测样品的含量。 也是以抗原抗体的免疫反应为基础，不同的是放射性核素标记的是抗体，以过量标记抗体直接与待测抗原结合。因此，溶液中放射性与待测物的浓度呈正相关。为非竞争性结合分析。 Ag＋Ab*(过量)===Ag.Ab*＋Ab* 单位点法： Ag＋Ab*(过量) Ag.Ab*＋Ab*(加抗原吸附剂去除多余Ab*)。 双位点法(Ab2为McAb) 具有代表性的固相免疫放射分析法： 固相Ab1(试管壁上)+Ag (固相)Ab1.Ag (过量) + 过量Ab*2((McAb) 固相Ab1.Ag.Ab*2 +剩余Ab*(洗去) 双位点法(Ab1为McAb) 固相Ab1-McAb(试管壁上)+Ag (固相)Ab.Ag (过量) + Ab*2(过量) 固相Ab1.Ag.Ab*2 +剩余Ab*(洗去) 标记第三抗体法 与双位点法相似，只是两种抗体均不标记，而是反应结束后