第二章蛋白质化学2.pptVIP

蛋白质结构的主要层次 一、维系蛋白质三维结构的作用力 构象是分子内所有原子或原子团的空间排布所形成的一种立体结构，有机分子中单键的旋转就从一种构象变成另一种构象。 天然蛋白质分子都有与其生物活性相关的一种或少数几种构象。 稳定蛋白质三维结构的作用力：次级键（主要）和共价二硫键。 维持蛋白质分子构象的作用力a.离子键 b.氢键 c.疏水键 d.范得华力 e.二硫键 二、蛋白质的二级结构 酰胺平面与α-碳原子的二面角（ φ和ψ ） 完全伸展的多肽主链构象 （二）蛋白质二级结构主要类型 1. α－螺旋（α-helix） 2. β－折迭（β-pleated sheet） 3.β－转角（β-turn） (四）蛋白质的超二级结构 三、蛋白质的三级结构 卵清溶菌酶的三级结构中的两个结构域 四、蛋白质的四级结构 血红蛋白的变构效应和输氧功能 血红素结构 四个与血红素的吡咯环的N结合； 一个与肽链分子中的组氨酸咪唑基的氮原子相连； 空着的一个配位键可与O2可逆地结合，结合物称氧合血红蛋白（HbO2）。 协同效应(cooperativity) 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。 如果是促进作用则称为正协同效应 (positive cooperativity) 如果是抑制作用则称为负协同效应 (negative cooperativity) 煤气中毒的机制 一氧化碳（CO）也能与血红素Fe原子结合。由于CO与血红蛋白结合的能力是O2的200倍，因此，人体吸入少量的CO即可完全抑制血红蛋白与O2的结合，从而造成缺氧死亡。 急救方法是尽快将病人转移到富含O2的环境中（如新鲜空气、纯氧气或高压氧气），使与血红素结合的CO被O2置换出来。 第五节　蛋白质的重要理化性质 一、蛋白质胶体性质 二、蛋白质两性解离性质和等电点 等电沉淀技术：利用蛋白质在等电点pH条件下，蛋白质为电中性，易发生絮结沉淀这种性质进行分离制备。 蛋白质电泳：利用蛋白质在溶液pH值不等于等电点的条件下带电的性质，在直流电场中向其所带电荷相反电极移动的性质，将不同带电性质的蛋白质进行电泳分离技术。 三、蛋白质变性与复性 变性蛋白质的性质改变： ①物理性质：旋光性改变，溶解度下降，沉降率升高，粘度升高，光吸收度增加等； ②化学性质：侧链基团反应性增加，易被蛋白酶水解。 ③生物学性质：原有生物活性丧失，如酶失去催化活性、抗体失去免疫活性等。 核糖核酸酶变性与复性作用 四、蛋白质的沉淀 沉淀类型 A.可逆沉淀/不变性沉淀 在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部、空间结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于溶液中。这种作用称为可逆沉淀反应。 大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质以及利用等电点的沉淀提纯蛋白质时，常利用可逆沉淀反应。 盐析：在蛋白质溶液中加入高浓度的硫酸铵、氯化钠等中性盐，使蛋白质沉淀析出的现象。（破坏蛋白质颗粒的水化层，同时又中和了蛋白质表面的电荷。） 盐溶：在盐浓度很稀的范围内，随着盐浓度增加蛋白质的溶解度随之增加，这种现象为盐溶。（蛋白质表面电荷吸附盐离子后，增强了蛋白质和水的亲和力。） 分级盐析：同一溶液不同相对分子质量的蛋白质，可通过逐步提高盐浓度的方法逐一沉淀分离出来。（相对分子质量大的容易盐析，相对分子质量越小，所需盐浓度越高。） B.不可逆沉淀/变性沉淀 　在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性，这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解于原来溶剂或水溶液中。这种作用称为不可逆沉淀反应或变性沉淀。 重金属盐、生物碱试剂，强酸、强碱、加热、震荡、超声波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。 蛋白质变性、沉淀、凝固之间的关系 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在而并不析出，例如：在强酸碱中变性的蛋白质在强酸碱溶液中仍存在电荷效应，所以不表现为沉淀现象。 沉淀的蛋白质也未必都已变性。 加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝固。因此，凡凝固的蛋白质一定发生变性。 五、蛋白质主要呈色反应 双缩脲反应 与茚三酮反应 六、蛋白质的紫外吸收特性 第六节 蛋白质相对分子质量的测定 化学测定法 超离心沉降速度法 凝胶过滤法 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法 一、化学测定法 根据化学成分测定最小相对分子质量： 利用化学分析定量测定蛋白质中某一特殊元素的含量，并假定蛋白质分子中含1个这种元素，即可测算最低Mr。 如