医学论文：番荔枝内酯化合物对人肝癌细胞株hepg2的作用.docVIP

???????????????? 作者：任凤梅,蒯玉花,张晓春,彭海燕,王明艳,章永红【摘要】? 目的 研究番荔枝内酯as-4在体外对人肝癌细胞株hepg2生长的抑制作用。方法 设as-4不同浓度组(6.25、12.5、25、50 μg/ml)、顺铂阳性对照组(25 μg/ml)和空白对照组,常规培养24、48 h,进行mtt比色试验和倒置相差显微镜观察。结果 as-4可明显抑制hepg2细胞的生长,最高抑制效应达到91.68%,且有细胞毒性的时间和剂量依赖关系,48 h ic50为6.67 μg/ml。结论 番荔枝内酯as-4在体外对人肝癌细胞株hepg2有杀伤作用,显示出较强的细胞毒活性。 【关键词】? 番荔枝内酯；hepg2肝癌细胞株；四甲基偶氮唑蓝 ??? abstract：objective to observe the inhibitory action of annonaceous acetogenins as-4 on human liver cancer cell line hepg2 in vitro. method using different concentration of annonaceous acetagenins group (6.25, 12.5, 25, 50 μg/ml), control group (25 μg/ml) of masculine (ddp), control blank group, after routine culture of 24 or 48 hours, the effect of annonaceous acetogenins as-4 on hepg2 was analyzed by colorimetry assay (mtt) and inverted phase-contrast microscope observing. result as-4 had the best inhibitory effect on hepg2, the highest inhibitory rate was 91.68%, and the effect was time-dosage dependent, and the 48 h ic50 was 6.67 μg/ml. conclusion as-4 has lethal effect on hepg2 in vitro, and shows obvious cytotoxic effect. ??? key words： annonaceous acetogenins；human liver cancer cell line hepg2；mtt???? 番荔枝(annona squamosa linn.)为番荔枝科(annonaceae)番荔枝属(annona)植物,我国浙江、云南等省区均有栽培。为研究其生理活性成分,我们对该植物种子的化学成分进行分析,从中得到3个番荔枝内酯化合物(annonaceous acetogenins),通过体外药物敏感试验筛选发现其中1个内酯as-4具有很强的体外细胞毒活性。现将其抗肝癌作用的实验研究结果报道如下。　　1? 实验材料　　1.1? 药物 ??? 番荔枝内酯类化合物,为本课题组从番荔枝种子中提取分离所得,白色蜡状粉末,分子式c37h66o6。使用前以少许无水乙醇溶解,加生理盐水配制成所需浓度,乙醇终浓度不超过1%。　　1.2? 主要试剂和仪器?? 　　rpmi-1640(美国gibco公司),新生牛血清(杭州四季青生物制品公司),二甲基亚砜(dmso),四甲基偶氮唑蓝(mtt,美国sigma公司),使用前以rpmi-1640培养液配成5 mg/ml。96孔培养板(美国corning公司),微孔板式连续光谱测读仪(spectra max 340 pc 384 美国分子仪器公司),倒置相差显微镜(日本olympus公司),co2孵箱(日本hirasawa公司)。　　1.3? 瘤株 ??? hepg2肝癌细胞株由南京中医药大学海洋中心实验室提供。　　2? 实验方法　　2.1? 细胞培养??? hepg2肝癌细胞株接种于培养瓶中,加入rpmi-1640培养液(含10%灭活新生牛血清、青霉素1×105 u/l、链霉素1×105 u/l),于37 ℃、5% co2培养箱中培养,细胞呈单层贴壁生长,每3～5 d传代1次,传代时用0.25%胰蛋白酶消化1 min,以培养液吹打制成细胞悬液后接种。　　2.2? mtt比色试验?? 　　取对数生长期hepg2细胞(1×105个/ml),接种于96孔培养板,190 μl/孔,每孔加入番荔枝内酯类化合物10 μl,使终浓度分别为