3.1.1_DNA重组技术的基本工具.pptVIP

生物 选修3现代生物科技专题 目 录 专题1 基因工程 专题2 细胞工程 专题3 胚胎工程 专题4 生物技术的安全性和伦理问题 专题5 生态工程 专题1 基因工程 一、基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的生物类型和生物产品 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。 记一记 1.1 DNA重组技术的基本工具 * 简述基因工程培育抗虫棉的过程 一、分子手术刀------限制性核酸内切酶(限制酶） T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A * 限制酶所识别的序列有什么特点？ 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 图1-1 限制酶识别序列的中心轴线 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(6个,4、5、8个) 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 4000种。 （1）来源： （2）种类： （3）作用： （4）结果： 形成两种末端 黏性末端 平末端 1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”（小结） 记一记 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切点？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切点，产生四个黏性末端，两个。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端。 是不是把两者的黏性末端黏合起来，这样就真的合成 重组的DNA分子了? 实际还不够,还需要DNA连接酶进行连接。 思考题： 2、ＤＮＡ连接酶——“分子缝合针” 种类： 作用部位： E·coli DNA连接酶（黏性末端） T4 DNA连接酶 （黏性末端和平末端） 磷酸二酯键 DNA连接酶——分子缝合针 常用类型 E·coli??DNA连接酶 T4?DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 连接部位 相同点 双链 单链 在两DNA片段之间形 成磷酸二酯键 将单个核苷酸加 到已存在的核酸 片段的3’末端的 羟基上，形成磷 酸二酯键 都能形成磷酸二酯键 二者都由蛋白质构成 记一记 3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” （1）载体的作用 将外源基因转移到受体细胞中去。 运载体对外源基因进行大量复制。 （2）作为载体必须具备的条件 能够在宿主细胞中自我复制并稳定地保存。 具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 具有某些标记基因，便于进行筛选。 必需是安全的，不会对受体 细胞有害。 大小应适合，便于提取和操作 记一记 （3）常用的载体 质粒 动植物病毒 思考与探究 1.限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段： (1) …CTGCA??? (2) …AC??? (3) GC… ?? …G??????????? …TG??????? CG…（4）…G????? (5)????G…? (6) …GC ????? …CTTAA???? ACGTC…????? …CG (7) GT…??????? (8)AATTC… ???? CA…????????????? G… 你能用DNA连接酶将它们连接起来？ 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 * 2、为什么限制酶不能将自己的DNA分子剪切掉？ 1、DNA分子不