农作物秸秆木质素的生物降解性能研究.docVIP

农作物秸秆木质素的生物降解性能研究 摘 要：通过正交试验l16(54)分配表(采用5因素4水平进行设计)，根据各因素及水平的不同组合，采用固态发酵的方法探索出更加简单、高效的降解木质素的最优化组合方式。并考虑经过一定的生物学方法，探索使其变成一种生物型清洁能源的可行性。 关键词：正交试验 固态发酵 降解 最优化 1 前言 木质素也称木素，是一类高分子有机物质，其在植物界中含量仅次于纤维素，是一种极具潜力的可再生资源。其总与纤维素伴生，具有价廉、无毒、较好的可热塑和玻璃化特性，具有一定的应用前景。秸秆是一种含有丰富纤维素的可再生资源，基本组织是纤维素、半纤维素和木质素。我国农作物秸秆年产量超过6亿吨，除少部分被用于造纸、纺织等行业或用作粗饲料、薪柴外，大部分以堆积、荒烧等形式直接倾入环境，造成极大的污染和浪费。目前为止，超过95 %的木质素仍以“黑液”直接排入江河或浓缩后烧掉，很少得到有效利用。因此，对秸秆木质素的研究和利用显得尤为重要。从20世纪初开始，国内外学者一直在寻找降解木质纤维素的最佳途径，涉及的研究方法主要包括：化学法、物理法、物理化学法、生物降解法。而利用微生物降解木质素具有作用条件温和、专一性强、处理成本低等优点，不仅可以有效缓解环境污染，还可以变废为宝，实现资源再利用，已引起了国内外学者的关注。 2 材料与方法 2.1 材料与设备 (1)实验菌种 实验选用的菌种为白腐菌的典型种黄孢原毛平革菌(p.chrysosporium)，购于广东省微生物菌种保藏中心。 (2)实验材料 土豆(市售)；pda培养基；溶壁微球菌；木质素；玻璃容器或瓷器；ph试纸；细纱布； 胶头滴管；烧杯(50ml,100ml,500ml,1l)；玻璃棒；普通漏斗；定性快速滤纸；量筒 (5ml,100ml,500ml,1l)；坩埚；称量瓶；kh2po4(2.0mg·ml-1)；mgso4·7h2o(0.5mg·ml-1)；酒石酸铵(0.2mg·ml-1)；微量元素液(70ml·l-1)。其中微量元素液的成分为nacl(1.0mg·ml-1)，cocl2·6h2o(0.18mg·ml-1)，na2moo4·2h2o(0.01mg·ml-1)， znso4·7h2o(0.1mg·ml-1)，cacl2(0.1mg·ml-1)，cuso4·5h2o(0.01mg·ml-1)，mnso4·h2o(0.5mg·ml-1)，feso4·7h2o(0.1mg·ml-1)，alk(so4)2·12h2o(0.01mg·ml-1)，mgso4·7h2o(3.0mg·ml-1)，hbo3(0.01mg·ml-1)，nta(115mg·ml-1)。 (3)实验仪器 恒温箱；无菌操作台；恒温磁力搅拌加热器；烘箱；抽滤装置；高压蒸汽灭菌锅；粉碎机；电炉；分析天平；电子天平。 2.2 实验方法 (1)菌种转接 pda培养基(potato dextrose agar)：取去皮马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升，加葡萄糖20克，琼脂15克，溶化后分装，15磅灭菌30分钟。 将斜面菌种接种于搁置好的pda斜面上，于28℃培养5天左右，置于4℃冰箱内保存。 (2)菌种驯化 菌种接种在马铃薯(pda)琼脂培养基上，待培养5～7 d长满孢子后，刮取孢子制成浓度为2.0??06个·ml-1的孢子悬液。取5ml制得的孢子悬液接入麸皮、秸杆与土豆汁质量比为3：7：35(本实验中取秸秆粉1g，土豆汁3.5g)的灭菌固体培养料中,于37℃驯化培养。 (3)配制固态发酵培养液 鉴于国内外其他学者关于黄孢原毛平革菌液体培养条件的研究结果，本实验采用的液体基质的组成成分为：kh2po4 2.0mg·ml-1,mgso4· 7h2o 0.5mg·ml-1,酒石酸铵 0.2mg·ml-1,微量元素液70ml·l-1，ph自然。其中，微量元素液的成分为nacl 1.0mg·ml-1，cocl2·6h2o 0.18mg·ml-1，na2moo4·2h2o 0.01mg·ml-1，znso4·7h2o 0.1mg·ml-1,cacl2 0.1mg·ml-1,cuso4·5h2o 0.01mg·ml-1,mnso4· h2o 0.5mg·ml-1，feso4·7h2o 0.1mg·ml-1，alk(so4)2·12h2o 0.01mg·ml-1，mgso4·7h2o 3.0mg·ml-1，hbo3 0.01mg·ml-1，nta(氨基三乙酸)115mg·ml-1。 (4)固态发酵方法 本试验所采用采用4因素4水平正交试验设计,见表1。4因素分别为a菌种驯化时间、b吐温80的用量、c初始ph、d发酵基质含水率。各因素水平依次为：菌种驯化时间为2