蛹虫草深层培养联产纤溶酶和菌丝体的比拟放大研究.ppt

蛹虫草深层培养联产纤溶酶和菌丝体的比拟放大研究;蛹虫草（Cordyceps militaris）又名北冬虫夏草，是药食两用真菌。在生物分类学上，与冬虫夏草同属子囊菌纲、肉座菌目、麦角菌科、虫草属。蛹草含有多种生理活性物质，如核苷类化合物、多糖、糖醇、甾醇类、SOD酶（超氧化物歧化酶）、氨基酸类、维生素类等[1-3]，其主要的化学成分、药理、药效与野生冬虫夏草相似。;目前蛹虫草生产仍以固体栽培为主，液体深层发酵研究的时间不长，许多培养条件（如培养周期等的研究）还不成熟。但是液体发酵具有培养周期短、活性物质易于提取等优点，并且采用液体发酵培养的活性物质含量远高于人工栽培的含量。;对有氧发酵来说，主要涉及到发酵罐的搅拌转速通风量这2个参数。因为搅拌器的转速和通风量的大直接影响到发酵体系的物质传递及氧气的供给程度从而影响到微生物细胞的生长和代谢。因此，在已经优化了的小型试验条件的基础上，确定大型发酵装置的搅拌转速和通风量是放大的关键步骤。发酵参数的放大方法有很多，最常用的是利用KLa相似的方法来进行发酵参数的放大。;本试验以蛹虫草为菌种，采用液态通风深层发酵方法，以溶氧速率常数KLa为基本放大原则，研究了从摇瓶培养到10L和100L发酵罐培养的放大规律，以期为利用蛹虫草发酵生产纤溶酶的工业化提供实验和理论基础。;一：材料与方法1.1：试验材料与试剂;1.2试验仪器与设备;1.3 试验方法;二： 结果与讨论2.1 10L发酵罐通风量与搅拌转速的初步确定;图1 　　10L发酵罐50r/min(A)、100r/min(B)、150r/min(C）搅拌转速下各通风量条件下的KLa值。;由图1可知，在10L发酵罐中，搅拌转速为50r/min，通风量为0.7m3/h时；搅拌转速为100r/min，通风量0.6m3/h时；搅拌转速为150r/min，通风量0.5m3/h时所测得的KLa 值与摇瓶中蛹虫草深层培养产纤溶酶最适条件下的KLa值比较一致。由于亚硫酸钠氧化法测定KLa试验方法本身存在较大误差，加之实罐发酵过程中发酵液的黏度较大，所以实际发酵过程中的搅拌转速和通风量需要通过实罐发酵进一步确定。;2.2 10L发酵罐中培养蛹虫草产纤溶酶和　　　　菌丝体的放大试验结果;图???　　　１０Ｌ发酵罐在同分量为０.７ｍ3／ｈ（Ａ）、１００ｒ／ｍｉｎ、通风量为０.６ｍ3／ｈ（Ｂ），１５０ｒ／ｍｉｎ、通风量为０.５ｍ3／ｈ（Ｃ）的条件下结果;由图2可以看出，在10L发酵罐中，如果以纤溶酶主要指标，搅拌转速为100r/min，通风量为0.6m3/h是最优的发酵条件。;2.3 100L发酵罐通风量与搅拌转速的初步确定;由上图可知，在100L发酵罐中搅拌转速100r/min，通风量为2m3/h时，KLa为73.62h-1，这与摇瓶优化条件下的KLa相当，但是考虑到在蛹虫草实罐发酵时发酵液黏度的增加以及测量方法的原因，应该适当增加通风量才能满足要求，所以在搅拌转100r/min时，通风量定为3m3/h为试验条件。同样道理，在150r/min时，通风量确定为2m3/h为试验条件进行100L发酵罐发酵。;2.4 100L发酵罐中培养蛹虫草产纤溶酶的放大试验结果;由上图可知，搅拌转速为150r/min，通风量为2ｍ3/h，蛹虫草菌丝体的总体生长状况优于摇瓶条件下菌丝体生长的情况。与搅拌转速100r/min，通风量3ｍ3/h相比，生物量（34.78g/L）提高6.3%，且菌丝体最大量获得时间缩短了60h；纤溶酶活力（溶圈面积44.86mm2）提高了51.61%，但是仍然没有达到摇瓶中的优化果。菌丝体产量却比摇瓶发酵条件下有了很大的提高。;三：结论