《中药制剂分析》高效液相色谱法在中成药检验中的应用2.ppt

高效液相色谱法在中成药检验中的应用（二） Application of HPLC to Quality Control of Traditional Chinese Patent Medicine 主讲人 梁延寿 （一）测试溶液的制备 按各品种项下规定制备对照品溶液和供试品溶液。操作应严格规范，定量取样、提取、纯化、转移和稀释，避免“跑、冒、滴、漏”。 （二）系统适应性试验 ▲采用药品标准规定的对照品和条件对色谱系统进行试验考查，包括色谱柱的理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四项指标。其中分离度和重复性更具实用意义。 ▲用于药品检验的色谱系统，应符合药典对系统适应性试验的规定。否则应对色谱条件作出适当的调整，使其达到有关规定。 ▲各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变, 以达到系统适用性试验的规定。 1.色谱柱的理论板数（n） 考察柱效 n值越大柱效越高 2.分离度（R） 考察分离效果 R值越大分离效果越好 在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，按下式计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度。除另 有规定外，应大于1.5。 3.重复性 考察测量的精密度 在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样3～5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0％。 RSD计算公式 4.拖尾因子（T） 考察色谱峰的对称性 T 值越接近于1.0 色谱峰的对称性越好，测量的准确度越高。 采用峰高法测量时，应检查待测峰的T是否符合规定。除另有规定外，T应在0.95～1.05之间。 （三）上机测定 按规定分别精密吸取一定量的对照液和供试液，注入色谱仪测定，记录色谱图和有关数据。 （四）数据处理和结果判断 （1） 利用保留时间（tR）进行定性鉴别 （2） 利用峰高（面积）进行含量测定 （3）利用特征峰的相对保留时间和峰面积比 值等参数对药品进行指纹图谱鉴定 四、HPLC在药品检验中应用 （一）定性鉴别 （保留时间比较法） 1.原理 在同一色谱条件下，相同的成分具有相同的色谱 性质和色谱行为，其色谱峰也就具有相同的保留时间。因此比较供试品色谱图和对照品色谱图，若前者中某一色谱峰的保留时间与后者色谱峰保留时间相同时，即可判定供试品中存在某种成分或某种药味。所谓保留时间相同是指基本相同, 彼此相差百分之几秒是允许的。 2.实例 百令胶囊的鉴别 本品为发酵虫草菌粉（CS-C-Q80）制成的胶囊。中国药典收载了TLC鉴别法和HPLC鉴别法等，在此仅介绍核苷类成分的HPLC鉴别法。该法采用了先进的梯度洗脱法，并以腺苷等多个组分为指标进行鉴别。 （1）色谱条件：C18柱， 检测波长为260nm， 理论板数按腺苷峰计算应不低于3000，以乙睛为流动相A，以0.04mol/L磷酸二氢钾为流动相B，按下表进行梯度洗脱： （2）腺苷对照液制备 取腺苷对照品适量，加0.5％磷酸溶液制成每1ml含12μg的溶液，即得。 （3）尿苷对照液制备 取尿苷对照品适量，加10％甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得。 （4）对照药材溶液制备 取发酵虫草菌粉（CS-C-Q80）对照药材0.5g，照供试液制备方法制备。 （5）供试液的制备 内容物（0.5g） （6）测定法 分别吸取上述四种测试溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。除溶剂峰外，供试品色谱应呈现与对照药材色谱保留时间相同的六个主色谱峰，与腺苷、尿苷对照品保留时间相同的色谱峰。 （二）含量测定（外标法） 1.原理 在一定浓度范围内，被测成分的质量与其峰面积或峰高成线性关系。因此，可根据被测成分峰面积、对照品峰面积和对照液浓度，求算出供试液中被测成分的浓度。再根据稀释倍数、取样量等参数，即可计算出被测成分的含量。 2.计算步骤 （1）计算供试液中被测成分的浓度 （2）计算药品中被测成分的含量 3.实例 藿香正气水中厚朴酚与和厚朴酚总量的测定 本品由苍术、陈皮、厚朴（姜制）、白芷等十味中 制成的液体制剂，每支装10ml（标示装