面肩肱型肌营养不良实时荧光定量PCR诊断方法的影响因素分析.pdfVIP

军 进 修 学 院 学 报 Ju12011 JChinesePLAPostgradMedSch ，’32 …(7) · 748 · 面肩肱型肌营养不 良实时荧光定量PCR诊断方法的影响因素分析 苏全喜 ，李婉仪 ，张 成 。，熊 符 ，洪铭范 ，刘爱群 ，田素娟 广东药学院附属第一医院 神经内科，广州 510080； 东莞市人民医院 神经内科，东莞 523018； 中山大学附属第一医院 神经科，广州 510080； 南方医科大学基础医学院 医学遗传学教研室， 广州 510515；广东药学院 生命科学与生物制药学院，广州 510006 摘要 ：目的 分析探讨面肩肱型肌营养不 良(FSHD)实时荧光定量聚合酶链反应 (FQ—PCR)诊断方法的影响因素。方法 通过 改变镁离子终浓度、PCR扩增中退火温度、退火时间或延伸时间、RNaseH酶用量和活性等，确定 FQ—PCR诊断 FSHD的 最佳反应条件。结果 退火温度 55℃、时间20s、镁离子终浓度 5．0raM、RNaseH酶用量 IOOU、RNaseH酶在95℃下灭活 8min为最佳反应条件 ，其中RNaseH的活性选择对FSHD诊断的特异性影响较大。结论 通过降低RNaseH酶的活性可提 高诊断的特异性，最终确立了FSHD的FQ—PCR基因诊断最佳反应条件。 关键词 ：肌营养不良，面肩肱型 ；实时荧光定量PCR；RNaseH酶活性 中图分类号 ：R7,16．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—1139(2011)o7-o748-o4 DOI：CNKI：I1-3275／R1448．001 网络出版时间 ：2011-03—0414：48：58 网络出版地址 ：http：Hwww．cnki．net／kcmsd／etail／11．3275．R1448．001．htm1 Factorsinfluencingdiagnosisoffaeioscapulohumeralmusculardystrophybyreal-tim e fluorescentquantitativePCR suQuan—xi，LIWan—yi，ZHANGCheng，XIONG ，HONGMing—fan，LIUAi—qun，TIANSuduna DepartmentofNeurology，FirstAffi liatedHospitalofGuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510080，Guangdong Province，China；DepartmentofNeurology，DongguanPeople’sHospital，Dongguan523018，GuangdongProvince，China； DepartmentofNeurology，FirstAffiliatedHospitalofSunYat—SenUniversity，Guangzhou510080，GuangdongProvince，China； DepartmentofM edicalGenetics，SchoolofBasicM edical Sciences，SouthernM edical University，Guna gzhou510515，Guna gdong Province，China；’SchoolofLifeScienceandBiopharmacology，GuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006， Guna gdongProvince，China Correspondingauthor：ZHANG Cheng．Email：chengzhang100@hotmail．com Abstract：ObjeetiveToanalyzehtefactorsinfluencingdiagnosisoffacioscapulohumeralmusculardystrophy(FSHD)byreal—time fluorescentquantitativepolymerasechainreaction(FQ—PCR)．MethodsOptimalreactionconditionsofFQ-PCRforthed