SPR生物传感器快速检测大肠杆菌O157H7的研究.pdfVIP

第31卷，第lo期 光谱学与光谱分析 VoL 2 01 1年10月 and October，2011 SpectroscopySpectralAnalysis SPR生物传感器快速检测大肠杆菌0157：H7的研究 斯城燕，叶尊忠’，王一娴，盖 玲，王剑平，应义斌 浙江大学生物系统工程与食品科学学院，浙江杭州310029 摘要建立了一种基于表面等离子体共振(surfaceplasmonresonance，SPR)原理的牛物传感器方法，实现 t 了快速检测大肠杆菌0157H7。研究选用BIACORE3000系统及葡聚糖修饰的CM5芯片，先用EI℃／ NHS将芯片活化，然后抗体直接通过酰胺键同定在金表面，再用乙醇胺封闭，这样处理之后的芯片就町用 于检测大肠杆菌0157：H7。利用NaOH溶液对j醛片再生，实现对多个不同浓度样品检测，采用时间对响应 单位(RU)记录数据。该法检测大肠杆菌0157；H7的检测限为3×105 CFU·mL-1，RU变化值和大肠杆菌 0157：H7的浓度在一定范围内相关性良好，相关系数达到0．99。检测时间短。一个样品仅需5～7min。再 生效果好，芯片可重复使用50次以上。可快速、在线、稳定地检测大肠杆菌0157：H7，有望成为一种在线 检测食品致病性微生物的有力手段。 关键词SPR；大肠杆菌；快速检测；再生 中图分类号：Q67 文献标识码：A IX)l：10．3964／j．issn．1000-0593{2011110-2598—04 折射率(refractive units， 引 言 RU)来表征。有研究表明SPR对温度变化敏感，温度的变化 会对等离子体的共振频率产生影响，因此恒定温度是SPR 根据中国疾病预防控制中-L,(CDC)的统计报告表明，我生物传感器检测研究的重要条件。SPR牛物传感器具有无需 国每年发生的由致病菌引起的食物中毒事件占食物中毒事件 标记、在线检测、可再生、无样品前处理等优点[3]，近年来 总数的30％～90％，目前大肠杆菌0157：H7是国际公认的已成为研究热点。 食源性致病菌之一。继1983年美国首次发生大肠杆菌0157目前，食源性致病菌及其毒素是SPR牛物传感器检测 ：H7引起的食物中毒事件以来。1999年我国部分地区爆发 的主要日标[4]。国内外关于SPR生物传感器检测大肠杆菌 大肠杆菌0157；H7感染性腹泻，2006年9月美国又爆发大的报道比较多is-s]，但是这些研究中，作为关键技术的抗体 肠杆菌0157：H7引起的毒菠菜事件，大肠杆菌0157：H7 固定大多数是基于生物素一亲和索系统原理，虽然检测限最 引发食物中毒事件已成为威胁全球人群健康的公共卫生问 低可达到102CFU·mL一，但实验过程繁琐，检测时间较 题[11。 长，实验仪器以小型化Spreeta为主，携带方便，价格较低， 传统的检测方法如PCR和ELISA等，尽管能在复杂背比较适合野外检测．但也存在一些问题，如无恒温功能、重 2000 景中检测，检测限较低，但存在对操作人员要求高、耗时长、 复性差等缺点。Waswa等L91采用BIACORE