通过木糖异构酶路径发酵木糖的耐热工程酵母的构建.docVIP

  通过木糖异构酶路径发酵木糖的耐热工程 酵母的构建# 5 10  摘要：为了提高耐热酵母 Kluyveromyces marxianus 利用木糖发酵的能力，在此酵母中重建 了通过木糖异构酶的代谢路径。其中内源木糖还原酶及木糖醇脱氢酶的基因被敲除，而来自 Orpinomyces 的木糖异构酶在密码子优化以后在这个双重敲除株中进行表达。获得的菌株进 一步通过 32 轮转接驯化后得到了一个能够快速利用木糖的菌株 YRL005。在 42°C 此菌株利 用木糖的生长率为 0.154/h； 可以利用 30.15 g/l 木糖产生 11.52 g/l 乙醇，得率为 0.38g/g, 生 产率为 0.069g/l/h；并且没有木糖醇及甘油的积累，是目前已知在 42°C 以上利用木糖发酵的 最好菌株。 关键词：木糖；木糖异构酶；耐热酵母；乙醇；发酵 中图分类号：Q-31 15 Improving the xylose fermentation at elevated temperature WANG Rongliang, WANG Dongmei, HONG Jiong (School of Life Sciences, University of Science and Technology of China, HeFei 230026) Abstract: ITo improve the xylose fermentation ability of a thermotolerant yeast, a xylose 20 25 30 35 40 assimilation pathway through xylose isomerase was constructed. The genes encoding xylose reductase (KmXyl1) and xylitol dehydrogenase (KmXyl2) were disrupted in K. marxianus YHJ010 and the resultant strain was named YRL002. A codon-optimized xylose isomerase gene from Orpinomyces was transformed into K. marxianus YRL002 and expressed under GAPDH promoter. The transformant was adapted in the SD medium containing 1% casamino acid with 2% xylose as sole carbon source. After 32 times trans-inoculation, a strain named YRL005 which can grow at a specific growth rate of 0.154/ h with xylose as carbon source was obtained. K. marxianus YRL005 could ferment 30.15 g/l of xylose and produce of 11.52 g/l ethanol with a yield of 0.38 g /g, production rate of 0.069 g/ l h at 42°C. It is a good platform to construct thermo-tolerant xylose fermentation yeast. Keywords: xylose; xylose isomerase; thermo-tolerant yeast; ethanol; fermenatation 0 引言 温室气体排放的增加和全球的温暖化、石油资源的枯竭和日益上涨的能源需求，以及国 家能源安全问题使得可再生能源的利用和开发是成为 21 世纪最重要的课题之一。其中从生 物质生产燃料乙醇是其中重要的一个方向。木质纤维素类是地球上最丰富的可再生生物资源 1 2 3 天然的木质纤维素类主要是植物纤维原料，主要成分含有 40-50%的纤维素、20-30%的 半纤维素，另外还有木素等组分。其中半纤维素主要成分是木聚糖，木聚糖的水解主要产物 是木糖。迄今为止发现很多种微生物能够代谢木糖产乙醇，包括细菌、真菌和酵母菌。酵母 木糖代谢和发酵代谢途径比葡萄糖代谢途径复杂得多,首先是在依赖 NADPH 的木糖还原酶 （XR）的作用下还原木糖为木糖醇，随后在依赖 NAD+ 的木糖醇脱氢酶（XDH）作用下氧 -1-   化形成木酮糖,再经木酮糖激酶（XK）磷