毛白杨磷脂酶PtoPLC4的原核表达、纯化及鉴定.docVIP

  毛白杨磷脂酶 PtoPLC4 的原核表达、纯化 及鉴定# 张杰伟，张中保，陈亚娟，魏建华** 5 10 15 20 25 30 35 40 （北京市农林科学院，北京农业生物技术研究中心，北京 100097） 摘要：磷酸肌醇特异性磷脂酶 C(Phosphoinositide-specific phospholipase C，PI-PLC)是一类重 要的磷酸肌醇信号途径中的酶。将已克隆的磷酸肌醇特异性磷脂酶 C 基因（PtoPLC4, GeneBank No. JX861370）的编码区插入到原核表达载体 pET28a 上，经酶切和测序鉴定，成 功获得了读码框正确的磷脂酶 C 原核表达载体（pET28-PtoPLC4）；再将表达载体转化大肠 杆菌表达菌株 BL21（DE3），经 IPTG 诱导后发现该重组蛋白主要以包涵体的形式存在。 采用亲和纯化从可溶性蛋白中纯化到大小为 64KD 的蛋白条带。Western-Blotting 分析亲和 纯化所得蛋白可以与 His 单克隆抗体发生免疫交叉反应，表明纯化所得蛋白是 PtoPLC4 重组 蛋白。该结果为进一步研究 PtoPLC4 的生物学功能奠定了基础。 关键词：毛白杨；PtoPLC4；原核表达；蛋白纯化 中图分类号：S722 Expression, Purification and Identification of Pop