单克隆抗体与免疫荧光染色技术.pdfVIP

《福建畜牧兽医》 年第 卷增刊 #$$ ! # ! 来，这就是筛选过程。由于每一个免疫淋巴细胞只能对 单克隆抗体与免疫荧光染色技术 单一的抗原决定基产生特异性抗体，因此将筛选出的 ! # ! ! ! ! 融合细胞通过克隆化，使其集落生长成为单克隆细胞 刘健宏 王 标 庄向生 王长兵 周伦江 刘玉涛 系，就能产生大量单一的高纯度抗体，这种抗体就称为 ! 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 %$$ ! “ ” 单克隆抗体 。 # 福建省农业厅农业执法总队 %$$$ ! !5 # 荧光是染料吸收一种波长的光线，发出更大波长 自从’()* 和+,)-./,0 于 !12% 年首创杂交瘤技术 的光线的物理学过程。处于基态的荧光色素受到紫外 以来，单克隆抗体已应用于免疫学、生理生化、药理学、 线或兰紫外线光的照射而吸收足够的能量，而使色素 组织学、肿瘤学、微生物学等不同的学科，其应用之广、 外层电子处于激发态。这种激发态电子给无辐射跃迁 发展之快，促使医学、生物学领域起着巨大的变革。单 到第一能级后则随着进一步的辐射跃迁而回落到基 克隆抗体是利用细胞融合技术，在体外大量培养融合 态。在这辐射跃迁的同时释放能量，以可见光的辐射形 （ ） 细胞，由融合细胞产生大量的抗体。由于单克隆抗体只 式释放，这就是荧光。其特征能量 较激发光而言 小而 识别某一特定的抗原决定簇，所以它具有特异性强、成 波长长。这是由于部分能量以无辐射形式消耗的缘故， 分均一、灵敏度高、产量大、容易标准化生产等优点而 而波长则与能量成反比。 明显优于多克隆抗体。目前世界上己建立的单克隆抗 异硫氰酸荧光素（ ）是目前最为广泛应用的荧 =3 体品种数以万计，其中数千种已经上市。 光素。在碱性条件下，=3 分子上的异硫氰基—? @ 免疫荧光技术又称为荧光抗体染色方法，它是将 （ 3 @ A 能与抗体蛋白分子中的游离氨基 主要是赖氨酸 血清学方法和显微镜示踪方法结合起来的一种技术。 ） 的—?:# 和少量的末端氨基 经碳酰胺化而形成硫碳氨 这种技术是 等于 年首先建立的，在医学和 基键，结合为荧光标记抗体蛋白。 个分子的 有 3’’0- !14# ! B9 CD 生物学研究工作中的应用将近 多年。荧光抗体法是 个赖氨酸，但一般最多只能标记 个。因为只有未 %$ !% E #$ 将特异性抗原多次注入动物体，使之产生抗体，将免疫 质子化的自由氨基才能与=3 起加成反应。在抗体侧 球蛋白从血清中分离出，用荧光色素标记，制成荧光标 链游离氨基有赖氨酸的—?:# ，谷氨酸的胍