纳豆激酶活力测定.docVIP

纳豆激酶检测 操作程序 1-1）.制作生理盐水缓冲液 准备鹏酸和鹏酸钠。 鹏酸属酸性，鹏酸钠属碱性。 制作0.5ml的鹏酸生理盐水和0.5ml的鹏酸钠生理盐水。将ph值调整到7.8。 1-2).加入纤维蛋白原 准备纤维蛋白原。 将纤维蛋白原以0.4%的比例添加到已准备好的缓冲液中。 此时必须注意的是0.4%的添加比例。 纤维蛋白原没有100%的纯品。 0.4%是纯品的换算值。 一般在标签上会标明浓度。 如果浓度为50%，则纤维蛋白原按0.8%的比例添加； 如果浓度为80%，则纤维蛋白原按0.5%的比例添加。 1-3）.制作牛凝血酶溶液 准备牛凝血酶 将50U的牛凝血酶放入1ml的生理盐水中溶解 1-4）.制作plate 将（1-2）中所做的缓冲液10ml注入玻璃容器中。再将已制成的牛凝血酶0.5ml注入容器，搅拌凝固。这一步的操作手法如果不好的话，在均匀地混合搅拌以前就会凝固。另外，搅拌中如果混入杂质也不容易溶解。 （注：在容器中操作如果有困难的话，可以在试管中混合、搅拌；或是在废弃的注射器中混合、搅拌） 2－1）incubate 制作纳豆激酶溶液。 如果仅仅只是测试有无活性，则浓度多少随意。 如果是以鸟激酶为指标作对比实验，则需严格控制浓度。 纳豆激酶溶液每10μl 测定点位。 spotting后的容器在37度常温下incubate （使用孵化器也可） 2-2)测定面积 纤维蛋白在溶解后会形成圆形物。 ? 在2小时以后、4小时以后、24小时以后测量圆的面积。 纳豆激酶的研究进展 陈 志 文 徐 尔 尼 肖 美 燕 Study on Nattokinase CHEN Zhi Wen XU Er－ ni XIAO Mei－ yan Abstract: Compared with some traditional thrombolytics,nattokinase,which is found to be a strong fibrinolytic enzyme,is safer and lower－ cost.It is effective by oral administration,and expected to be a new thrombolytics.Its isolation、 purification and characteristics are introduced in this paper. The newly studies on its activity detection、 stability factors and high output are alse summed in this paper. Key words:nattokinase,activity detection,stability factors,high output 摘 要 ： 纳 豆 激 酶 有 很 强 的 溶 血 栓 能 力 ， 跟 传 统 的 一 些 溶 栓 剂 相 比 ， 具 有 安 全 性 好 、 成 本 低 、 口 服 有 效 等 优 点 ， 极 有 可 能 开 发 为 新 一 代 的 溶 栓 剂 。 介 绍 了 纳 豆 激 酶 的 分 离 纯 化 技 术 、 生 化 特 性 ， 并 对 纳 豆 激 酶 的 活 性 测 定 方 法 、 影 响 纳 豆 激 酶 稳 定 性 的 因 素 及 提 高 纳 豆 激 酶 酶 产 量 的 几 种 途 径 等 最 新 研 究 成 果 进 行 了 综 述 。 关 键 词 ： 纳 豆 激 酶 ； 活 性 测 定 ； 稳 定 性 因 素 ； 高 产 量 5.2 发 酵 条 件 的 优 化 5.2.1 固 体 发 酵 条 件 的 优 化 取 纳 豆 菌 接 种 蒸 煮 后 的 大 豆 ， 分 别 置 不 同 温 度 下 进 行 发 酵 ， 24h后 提 取 粗 酶 液 ， 测 定 酶 活 力 ， 发 现 最 适 宜 产 酶 的 温 度 是 30℃ ， 其 次 是 37℃ ， 后 者 相 对 酶 活 力 为 前 者 的 95％ 。 取 纳 豆 菌 分 别 在 30、 37℃ 下 发 酵 蒸 煮 的 大 豆 ， 每 12h取 样 测 定 酶 活 ， 发 现 两 种 温 度 下 发 酵 24h， 产 酶 量 达 到 最 高 。 虽 然 30℃ 下 酶 活 性 略 高 于 37℃ 下 的 ， 但 37℃ 下 产 酶 早 于 前 者 ， 且 酶 活 力 保 持 时 间 长 ， 因 此 37℃ 为 最 佳 产 酶 温 度 ， 24h为 最 佳 产 酶 时 间 。 5.2.2 液 体 发 酵 条 件 的 优 化 氮 源 ： 大 豆 渣 、 豆 浆 、 胰 蛋 白 胨 、 大 豆