香鱼LECT2基因的克隆及其组织表达差异.pdfVIP

细胞生物学杂志 Chinese Journal of Cell Biology 2009, 31(2): 277280 香鱼LECT2基因的克隆及其组织表达差异 * 杨红艳　陈　炯 　史雨红　李明云 (宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,宁波315211) 摘要　　LECT2 (leukocyte cell-derived chemotaxin 2)是一个多功能的蛋白质，其与细胞生长、 分化、损伤修复及免疫等过程相关。本研究通过设计简并引物,从香鱼肝脏cDNA文库中筛选 LECT2基因,该基因cDNA序列全长547个核苷酸, 3末端具有polyA尾,单一大开读框编码一个 由156个氨基酸组成的分子量为17 kDa的蛋白质。序列分析及系统进化树分析均表明,香鱼LECT2 与虹鳟LECT2最相似,且各物种LECT2的进化关系与目前接受的物种分类关系基本一致。香鱼 LECT2基因在香鱼许多组织中均有表达,而肝脏中的表达量最高,肾脏和脑中的表达量也较高。 关键词　　LECT2;克隆;序列分析; mRNA表达谱 LECT2 (leukocyte cell-derived chemotaxin 2)最 1.1.1实验动物 健康香鱼5尾,个体体重20~25 早分离自人T细胞SKW-3株培养液,它具有嗜中性 g,购自宁波水产大世界。 [1] 1.1.2菌株、载体和质粒 大肠杆菌TG1菌株和 粒细胞趋化活性 。人LECT2分子量为16 kDa,含 三个分子二硫键,在人肝脏中特异表达并分泌到血液 载体pBluescript SKII (+)由本实验室保存。 [2] 1.1.3主要试剂及耗材 DNA连接酶、T RNAiso 中 。新近的研究揭示, LECT2可能是一个多功能 4 的蛋白,其与细胞生长、分化、损伤修复及免疫等 试剂、 [3~6] Kit、限制性内切酶、ExTaq DNA聚合酶和cDNA 过程相关 。近年来,采用同源克隆和EST等分子 [2] Library Construction Kit等均购自TaKaRa公司; Gel 生物学技术,人们已克隆并测定了牛(Bos taurus) 、 [7] [8] Extraction Kit购自Omega公司。 小鼠(Mus musculus) 、鲤鱼(Cyprinus carpio) 、虹 [9] [5] 1.1.4引物合成及序列测定 引物合成及序列测 鳟(Oncorhynchus mykiss) 、斑马鱼(Danio rerio) 和 [6] 定由上海英骏生物工程公司完成。 大黄鱼(Pseudosciaena crocea) 等物种的LECT2基因。 香鱼(Plecoglossus altivelis)是东亚地区如中国、 1.2方法 日本和朝鲜等国特有的一种中小型名贵鱼类,虽然其 1.2.1香鱼LECT2基因cDNA序列的获得 用 养殖面积逐年扩大,但高密度的人工养殖导致病害频 RNAiso试剂提取香鱼肝脏总RNA,用 发,这些病害已成为制约香鱼养殖产业发展的瓶颈。 super纯化mRNA,以其为模板,采用 [10,11] Construction Kit构建香鱼肝cDNA文库,方法参照厂 因此,对香鱼免疫相关基因的研究日益受到重视 。 研究表明,杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)和 家说明。根据已报道的动物LECT2保守序列设计简 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)急性侵染试验 并引物 中,染病斑马鱼