透明质酸消化-粘多糖.docVIP

透明质酸消化-阿尔新蓝 目的：此消化程序用于增加多种粘多糖在阿尔新蓝染色中的特异性。 对照：小肠、阑尾或结肠，进行消化染色同时进行不消化染色。 固定：10% NBF, Bouins, or Hollandes. 技术：4μ石蜡切片。 设备：蒸馏水洗玻璃器皿。染色缸。 试剂： 0.1M 磷酸二氢钾： 磷酸二氢钾Potassium phosphate mono 1.36 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，标签日期和签名。保存于冰箱。保存期6个月。出现沉淀时丢弃。 0.1M 磷酸氢二钠： 磷酸氢二钠Sodium phosphate di 1.42 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，标签日期和签名。保存于冰箱。保存期6个月。出现沉淀时丢弃。 缓冲液： 0.1M 磷酸二氢钾 Potassium phosphate mono,0.1M 94.0 ml 0.1M 磷酸氢二钠 Sodium phosphate di, 0.1M 6.0 ml 混合溶解，标签日期和签名。保存于冰箱。保存期6个月。出现沉淀时丢弃。 透明质酸消化液： 睾丸透明质酸酶(Sigma) 0.025gm 缓冲液Buffer solution 50.0 ml 使用前混合，用后丢弃。 阿尔新蓝染色： 详见阿尔新蓝程序。 安全：穿戴手套、护目镜和白大衣。加热打开盖溶液应在通风橱中操作。避免接触和吸入。 程序： 1. 同一组织块贴两套切片，分别标记透明质酸消化与否。 2. 脱蜡至蒸馏水。 3. 置一套于缓冲液中，别一套放入透明质酸消化37°C 1 hour. 4. 两套切片均用流水冲洗 5 minutes. 5. 两套切片均用pH 2.5阿尔新蓝染色程序染色。 结果： 消化部分：透明质酸，硫酸软骨素A和C不着色 无消化部分：蓝色 核：微红粉红 参考文献： Luna L, Manual of Histologic Staining Methods of the A.F.I.P., 3rd Ed, 1968, pp 171-172, McGraw-Hill, NY. Sheehan D,Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd Ed, 1980, pp 174, Battelle Press, Ohio Bancroft J,Stevens A, Theory and Practice of Histological Techniques, 2nd Ed, 1982, pp 212, Churchill Livingstone, NY. 程序卡 透明质酸消化-阿尔新蓝 对照：小肠、阑尾或结肠，在进行消化染色同时进行不消化染色。 程序： 1. 同一组织块贴两套切片，分别标记透明质酸消化与否。 2. 脱蜡至蒸馏水。 3. 置一套于缓冲液中，别一套放入透明质酸消化37°C 1 hour. 4. 两套切片均用流水冲洗 5 minutes. 5. 两套切片均用pH 2.5阿尔新蓝染色程序染色。 结果： 消化部分：透明质酸，硫酸软骨素A和C不着色 无消化部分：蓝色 核：微红粉红 0.1M 磷酸二氢钾： 磷酸二氢钾Potassium phosphate mono 1.36 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，标签日期和签名。保存于冰箱。保存期6个月。出现沉淀时丢弃。 0.1M 磷酸氢二钠： 磷酸氢二钠Sodium phosphate di 1.42 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，标签日期和签名。保存于冰箱。保存期6个月。出现沉淀时丢弃。 缓冲液： 0.1M 磷酸二氢钾 Potassium phosphate mono,0.1M 94.0 ml 0.1M 磷酸氢二钠 Sodium phosphate di, 0.1M 6.0 ml 混合溶解，标签日期和签名。保存于冰箱。保存期6个月。出现沉淀时丢弃。 透明质酸消化液： 睾丸透明质酸酶(Sigma) 0.025gm 缓冲液Buffer solution 50.0 ml 使用前混合，用后丢弃。 阿尔新蓝染色： 详见阿尔新蓝程序。 0.1M 磷酸二氢钾： 磷酸二氢钾Potassium phosphate mono 1.36 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 ml 混合溶解，标签日期和签名。保存于冰箱。保存期6个月。出现沉淀时丢弃。 日期： 技师： 使用限期： 0.1M 磷酸氢二钠： 磷酸氢二钠Sodium phosphate di 1.42 gm 蒸馏水Distilled water 100.0 m