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实验三 肠道菌 实验内容 一、肠道杆菌鉴别培养基及菌落观察 二、肥达反应 肠道鉴别培养基 制备原则： 根据肠道致病菌一般不分解乳糖这一特点，肠道鉴别培养基中含有 Lactose+indicator 种类: 麦康克培养基- MacConkey agar 伊红美兰培养基-- Eosin—methylene blue(EMB)agar 中国蓝培养基--Chinese blue agar 志沙培养基--Salmonella and Shigella (SS) agar SS平板—— 分离肠道病原菌的强选择培养基 成分： 基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） 作用： 乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。 胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠道致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。 病原菌:小,无色,透明 非致病菌:大,红色 双糖管 发酵乳糖 H2S试验 发酵葡萄糖(产酸产气)及动力 双糖管接种方法 五糖发酵管 葡萄糖Glucose（red) 乳糖Lactose(yellow) 麦芽糖Maltose(blue) 甘露醇 mannitol(white) 蔗糖Sucrose(black) 指示剂： 溴甲酚紫 碱性: 呈紫色 如果糖被分解后，产酸, pH下降 由紫色变 黄色 大肠杆菌 副伤寒杆菌 伤寒杆菌 肥达试验(Widal test ) （二）材 料 1. 血清 2.已知抗原菌液： 伤寒沙门菌H、O抗原菌液 甲型副伤寒沙门菌鞭毛（PA） 乙型副伤寒菌鞭毛抗原（PB) 变形杆菌OX19 3.有机玻璃凹板、生理盐水、小瓶、滴管、试管架等。 注 意 肥达试验结果分析（1） 凝集程度： （＋＋＋＋）上层液澄清，细菌全部凝集于孔底 （＋＋＋）上层液基本透明，细菌大部分（75％）凝集于孔底 （＋＋）上层液半透明，细菌在孔底有明显凝集 （＋）上层液混浊，孔底有少量凝集 （－）不凝集，同于对照 书写报告：＋＋反应的最高稀释度为凝集效价 肥达试验结果分析（2） 肥达反应结果判定： O效价≥1：80 H效价≥1：160 副伤寒H效价≥1：80 O与H抗体的诊断意义： O、H效价均升高：已感染伤寒 O、H效价均低于正常值：未感染沙门菌或免疫力低下 O升高、H正常：某型沙门菌感染早期 H升高、O正常：以往接种过疫苗或非特异性回忆反应 双份血清的肥达反应： 后一次较前一次抗体效价增高四倍以上，有诊断价值 粪便标本肠道致病菌鉴别流程 实验报告 1、记录并分析肥达试验结果 2、记录并分析肠道杆菌五糖发酵结果 * 一、肠道杆菌鉴别培养基及菌落观察 上层：乳糖,Fe2+ 固体 下层：葡萄糖 半固体 指示剂:酚红 非致病菌红色 致病菌无色 ▼ 观察： 穿刺—斜面接种法 二、肥达反应 （一）原理 人患伤寒或副伤寒后，血清中产生特异性抗体，，此抗体在体外与相应细菌结合时，能使细菌发生凝集，肥达试验就是根据凝集反应的原理，用已知的伤寒沙门菌的鞭毛和菌体抗原(O与H)、甲型副伤寒沙门菌鞭毛（PA）、乙型副伤寒菌鞭毛抗原（PB)与不同稀释度的病人血清做定量凝集反应，测定病人血清抗体的含量，协助诊断伤寒和副伤寒。 由于伤寒和副伤寒的临床症状与斑疹伤寒有相似之处，因此常把肥达试验与外斐试验合在一起做。 NS 15d 抗原 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 Control 1:10 血清 15 d 1:20 Serum 15 d +NS 15d 1:40 Serum 15 d +NS 15d 1:80 Serum 15 d +NS 15d 1:160 Serum 15 d +NS 15d NS H O PA PB 3d hole 3d hole 3d hole