谷胱甘肽发酵条件的优化扩大及其分离纯化发酵工程硕士论文.doc

PAGE 摘 要 谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽化合物，具有清除自由基、解毒、抑制衰老、预防糖尿病和癌症、抑制艾滋病毒、提高人体免疫力等重要生理功能，在医学、食品、化妆品等领域具有广泛的市场前景。现有GSH生产能力远不能满足市场需求，所以采用GSH高产菌株发酵廉价原料转化为GSH，建立适合工业化分离纯化GSH的方法会带来巨大的社会和经济效益。 本文以富含GSH的啤酒酵母Y-14为材料，分别从以下四个方面进行研究： (1) 利用Plackett-Burman 试验设计、Box-Behnken试验设计法对啤酒酵母Y-14产GSH培养基进行优化，得到的最适培养基配方为: 葡萄糖20g/L，酵母膏10g/L，(NH4)2SO4 8g/L，KH2PO4 3g/L，MgSO4 0.15g/L。对优化结果进行验证 (2) 利用单因素试验对啤酒酵母Y-14产GSH发酵条件进行研究，结果得到摇瓶最适发酵条件为培养温度30℃、初始pH6.0、摇床转速180rpm、摇瓶装液量30mL/300mL、补料培养基添加时间20h。在此条件下，菌体胞内GSH含量达到31.56mg/g，GSH的产量可达249.2mg/L，较原来提高了102%。 (3) 利用10L自动发酵罐补料培养啤酒酵母Y-14，①采用恒速流加单一葡萄糖培养基，20h时添加前体氨基酸和ATP的方法，测得GSH的产量在52h时，达到最大值243mg/L。②采用恒速流加全营养培养基，36h时添加补料培养基的方法，测得GSH产量在52h达到最大值520.742mg/L。比较发现，第二批发酵罐培养菌体干重、GSH产量较第一批分别提高了122.5%、114.2%。 (4) 采用D001大孔树脂粗分离GSH，得到最佳分离条件为：上样pH3.0，浓度为61.4mg/100mL，流速为0.5mL/min，洗杂质用液为无水乙醇，洗脱液为1.5% HCl + 0.3mol/L NaCl，流速为3mL/min。GSH的平均收得率为69.11%，蛋白质去除率为64.8%。然后通过SephadexG-10脱盐纯化GSH，得到最适条件：Φ1.6cm×25cm玻璃层析柱，上样浓度为116.66mg/100mL，上样体积为20mL。结果GSH的平均收得率为96.21%。最后SephadexG-10分级分离纯化GSH，采用Φ1.6cm×50cm玻璃层析柱，最适上样体积为2mL，GSH的平均收得率为99.26%，蛋白质去除率为56.5%。GSH浓缩倍数平均为9.07倍，纯化倍数为8.67倍。 关键词： 啤酒酵母Y-14，谷胱甘肽，发酵罐，D001大孔树脂，SephadexG-10 Abstract Glutathione (GSH) is a tripeptide formed by glutamic acid, cysteine and glycin, it has important physiological functions such as removing free radical, detoxification, anti-aging, diabetes and cancer prevention, inhibition of HIV and improve the effectiveness of the human immune system, and has a wide range of market prospects in the fields of medical, food and cosmetics. But the existing production capacity of GSH is far from the market demand.Use microbial fermentation to translate cheap raw materials into high yielded GSH, and establish suitable industrialization separation and purification of GSH will bring enormous social and economic benefits. In this paper, the main research content and results are as follows: (1) Using Plackett-Burman and Box-Behnken experimental design optimized medium of Saccharomyces cerevisiae Y-14 which producing GSH. T