第八章 外源基因的表达.pptVIP

第八章 外源基因的表达 8.4.2.4 柱层析 柱层析：包括凝胶柱层析、离子交换层析、吸附层析、金属螯合层析、共价层析、疏水层析和亲和层析等。 层析的基本原理：所有的层析系统都是由互不相容的两相组成，一个是固定相即层析介质，一个是流动相。利用混合溶液中蛋白质分子的理化特性差异（如吸附力、分子形状大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等），使各组分以不同程度分布在两相中，并以不同的速度移动，最终彼此分开。 柱层析纯化蛋白质的步骤： 装柱 柱平衡 上样 洗脱 分部收集 检测 8.4.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE） 它是分子生物学实验中很常用的一种技术，适用于分离低分子质量蛋白质、小于1kb DNA片段及DNA序列分析。 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（acrylamide）和交联剂N,N′-甲叉双丙烯酰胺在有引发剂和增速剂的情况下聚合而成的。通常是丙烯酰胺单体在过硫酸氨（AP）的引发和N,N, N′, N′-四甲基乙二胺（TEMED）的增速下，产生聚合反应，形成长链。又在N,N′-甲叉双丙烯酰胺的作用下，聚丙烯酰胺长链发生交叉连接而形成凝胶。聚合链的长度和交叉连接的程度决定了凝胶网孔的大小。由于空气中的氧能够抑制丙烯酰胺单体的聚合，所以凝胶的制备是向封闭的双玻璃板夹层中灌胶完成的。聚丙烯