靶向P75 的siRNA 对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响.docVIP

１１２４  第 ３５卷第 １１期 ２０１３年 ６月 １５日  　　　　　　　　　　  第　三　军　医　大　学　学　报 Ｊ　Ｔｈｉｄ　Ｍｉ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉ  　　　　　　　　　　  Ｖｏｌ ３５，Ｎｏ．１１ Ｊｎ．１５　２０１３  论著  文章编号 １０００４０４（２０１３）１１１２４５  靶向 Ｐ７５的 ｓＲＮＡ对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响 陈素莲１，马　佳１，张　枫２，余新超３，李翠云３，杨清玲１，陈昌杰１　　（２３３０３０安徽 蚌埠，蚌埠医学院：生化与分子生物学 教研室１，临床检验诊断学实验中心２，生物科学系３） 　　［摘要］　目的　构建 Ｐ７５特异小干扰 ＲＮＡ（ｓＲＮＡ）表达载体，并观察其对神经生长因子（ＮＧＦ）促乳腺癌细胞生长 及凋亡的影响。方法 　 通 过 ＧｅｎＢａｎｋ提 供 的 Ｐ７５ｍＲＮＡ 序 列，设 计 ３对 能 转 录 短 发 夹 状 ＲＮＡ 的 ＤＮＡ 序 列，构 建 Ｔ 果最强的干扰片段；以此干扰片段转染至乳腺癌 ＳＫＢＲ３细胞，利用 Ｇ４１８筛选稳定表达 Ｐ７５ｉＮＡ的 ＳＫＢＲ３细胞株，命名 为 Ｐ７５ｉＮＡ；ＭＴＴ检测 Ｐ７５干扰后 ＮＧＦ对细胞增殖作用的影响；流式细胞术检测细胞凋亡；建立荷乳腺癌小鼠模型，观 察 Ｐ７５干扰后对小鼠肿瘤生长和凋亡相关蛋白表达的影响。结果　 序列测定表明成功构建 Ｐ７５ｉＮＡ表达载体，实时荧 光定量 ＰＣＲ和 Ｗｅｓｅｒ ｂｌｔ检测结果显示 Ｐ７５ｍＲＮＡ和蛋白表达下调，尤以 Ｐ７５２ｉＮＡ干扰片段效果显著；ＭＴＴ检测显 示，ＮＧＦ能刺激细胞增殖，与 ＮＧＦ组 相 比，Ｐ７５ｉＮＡ干 扰 后 细 胞 增 殖 率 均 明 显 增 高 （Ｐ＜０．０５）；与 空 白 对 照 组 相 比， ＮＧＦ＋Ｐ７５ｉＮＡ组和 ＮＧＦ组的 细 胞 凋 亡 率 明 显 降 低 （Ｐ＜０．０５），ＮＧＦ＋Ｐ７５ｉＮＡ组 更 为 明 显；荷 乳 腺 瘤 小 鼠 中， Ｐ７５ｉＮＡ组小鼠的肿瘤生长明显超过未转染组和空载体转染组（Ｐ＜０．０５），且 Ｐ７５ｉＮＡ组 Ｃａｓａｓ 表达下降，Ｂｃｌ２ 表达增加，Ｂａｘ表达下降（Ｐ＜０．０５）。结论　 Ｐ７５特异干扰表达载体能有效降低 Ｐ７５的表达，增强 ＮＧＦ促乳腺癌 ＳＫＢＲ３ 细胞的增殖作用和抗凋亡作用，从而使肿瘤生长更为明显。 　　［关键词］　 乳腺癌；Ｐ７５；ｓＲＮＡ 　　［中图法分类号］　Ｒ３９４．２；Ｒ７３０．２３；Ｒ７３７．９　　 ［文献标志码］　Ａ  ＥｆｅｃｔｏｆｓＲＮＡ ｔａｎｓｅｃｔｏｎｔｒｇｅｔｎｇＰ７５ｇｅｎｅｏｎｐｒｏｌｆｒａｔｏｎａｎｄａｐｏｐｔｓｓｉ ｈｕｍａｎｂｒｅａｓ ｃａｎｃｅｒｃｅｌｓ ＣｈｅｎＳｕｌａｎ，ＭａＪａ，ＺｈａｎｇＦｅｎｇ，ＹｕＸｉｃｈａｏ，ＬｉＣｕｉｕｎ，ＹａｎｇＱｉｇｌｎｇ，ＣｈｅｎＣｈａｎｇｊｅ（ Ｄｅｐａｒｔｅｎｔｏｆ ＢｉｃｈｅｍｉｔｙａｎｄＭｏｌｃｕｌｒＢｉｌｇｙ２ＥｘｐｅｒｍｅｎｔｌＣｅｎｔｒｏｆＣｌｎｉａｌＬａｂｏｒｔｒ ａｎｄＤｉｇｎｏｓｓ ３ＤｅｐａｒｍｅｎｔｏｆＢｉｓｉｎｃｅ ＢｅｎｇｂｕＭｅｄｉａｌ Ｃｏｌｅｇｅ Ｂｅｎｇｂｕ，ＡｎｈｕｉＰｒｖｉｃｅ ２３３０３０，Ｃｈｉａ 　　［Ａｂｓｒａｃｔ］　Ｏｂｊｃｔｖｅ　 ＴｏｃｏｎｓｒｃｔａｎｅｘｐｒｓｉｎｖｅｃｔｒｏｆＰ７５ｓ ａｌｉｔｒｅｒｎｇＲＮＡ（ｓＲＮＡ），ａｎｄ ｔ ｄｅｔｒｉｅｉｓｅｆｅｃｔ ｏｎｔｅｃｅｌｐｒｌｆｒｔｏｎａｎｄａｐｏｐｔｓｓｉ ｂｒａｓ ｃａｎｃｅｒｃｅｌｓＳＫＢＲ３ｉｄｕｃｅｄｂｙｎｅｒｅ ｇｒｗｔ ｆｃｔｒ（ＮＧＦ）．Ｍｅｔｏｄｓ　 Ａｃｃｏｒｉｇｔ ｔｅｍＲＮＡ ｃｏｍｐｌｔ ｓｑｕｅｎｃｅｏｆＰ７５ｇｅｎｅｉ ＧｅｎＢａｎｋ，３ ｐａｉｓｏｆＤＮＡ ｓｑｕｅｎｃｅ ｔａｎｓｒｂｉｇ ｓｏｒ ｈａｉｐｉ ＲＮＡｓｏｆＰ７５ ｗｅｒ ｓｌｃｔｄ ａｎｄ ｄｅｓｇｎｅｄ， ａｎｄ ｔｅｎ ＴＭ ｃｅｌｓ ｔｅｓｒｎｇｅｓｉｔｒｅｒｎｃｅｅｆｅｃｔｏｆｔｅｍｗａｓｃｈｏｓｎｂｙｆｕｏｒｓｅｎｔｑｕａｎｔｔｔｏｎＰＣＲａｎｄＷｅｓｅｒ ｂｌｔｉｇ． Ｔｈｅｎｔｅｏｂｔｉｅｄｖｅｃｔｒｗａｓｔａｎｓｅｃｔｄｉｔ ＳＫＢＲ３ｃｅｌｓａｆｅｒｃｏｎｆｒｅｄｂｙｓｑｕｅｎｃｉｇ．Ｔｈｅｓａｂｌ ｃｅｌｌｎｅ ｅｘｐｒｓｉｇＰ７５ｓＲＮＡ ｗａｓｓｌｃｔｄｂｙＧ４１８ａｓａｙ．ＭＴＴａｓａｙｗａｓｐｅｒｏｒｅｄｔ ａｓｅｓ ｔｅｃｅｌｐｒｌｆｒｔｏｎ ｉｄｕｃｅｄｂｙＮＧＦａｆｅｒＰ７５ｉｔｒｅｒｎｃｅａｎｄｔｅｃｅｌａｐｏｐｔｓｓｗａｓｅｖａｌａｔｄｂｙｆｏｗｃｙｔｍｅｔｙ（ＦＣＭ）．Ｔｈｅ ｍｏｕｓ ｍｏｄｅｌｏｆｔａｎｓｌｎｔｄｂｒａｓｃａｒｉｏｍａｗａｓｃｏｎｓｒｃｔｄｂｙＳ