载银纤维的抗耐药菌性能研究.docVIP

2013 年 3 月  浙江纺织服装职业技术学院学报  第 1 期第 1 页  doi：10.3969/j.issn. 1674-2346.2013.01.001 载银纤维的抗耐药菌性能研究  林  玲  摘  要：通过对含有耐氨苄青霉素质粒的转化制备得到了耐药菌，并通过定性和定量试验，介绍了载银纤维的抗菌 性能，并结合 SEM结果分析了载银纤维的抗菌机理。结果表明该载银纤维对含有耐氨苄青霉素质粒的耐药菌有很好的抑 制作用，甚至导致了细菌的膨胀破裂。 关键词：载银纤维；耐药性；耐药质粒；抗菌性能 中图分类号: TS101.92+1 文献标识码: C 文章编号: 1674-2346 (2013) 01-0001-04  近年来，随着抗生素和各类抗菌药的使用，耐药菌迅猛发展，而且常为多重耐药菌，对患者的健康 和生命构成了严重的威胁，因此，如何控制和减缓细菌耐药性，以及开发针对耐药菌的抗菌材料，引起 了医学界以及其他相关学科研究人员的关注。载银纤维具有优异的抗菌性能 [1]，以其低毒、耐药性发生 率低等独特优势，被广泛应用于临床，用来治疗各种感染性疾病。因此，我们通过对耐药质粒的转化制 备耐药菌，并通过载银纤维对耐药质粒转化的影响，以及对耐药菌的抗菌性能进行了研究，为载银纤维 作为耐药菌的抗菌材料奠定一定的基础。 1 1.1 材料与方法 材料 1.1.1 抗菌材料与质粒、菌种 载银纤维由深圳洋仟应用技术有限公司提供；耐药质粒为 pcDNA3.1（+） /myc-His A（简写： pcDNA3.1），分子量为 5.4kb，带有抗新霉素（Neor）和氨苄青霉素（Ampr）的标记基因，为青岛大学医 学院惠赠；感受态细菌为 E.coli DH5 菌株，由上海同济大学医学院惠赠。 1.1.2 试剂和仪器 试剂包括：PBS、Amp 抗生素、LB 培养液、含 Amp 抗生素 LB 培养基。试剂均需高压灭菌。 仪器包括：超净工作台、振荡培养箱、低温离心机、离心管、分光光度计、冰盒、不同型号的枪头、 微量移液器、一次性培养皿（美国 alpha）、烧瓶等。 1.2 1.2.1 试验方法 银纤维的处理 将单纤维剪成 38mm，在紫外灯下灭菌，纤维多次翻动，每次光照 30min。 1.2.2 耐药菌的制备（即质粒的转化）[2]  ———————————— 收稿日期：2012 － 12 － 10 基金项目：宁波市科技局自然科学基金项目《医用载银非织造布的制备、性能及其抗菌模型研究》[项目编号：2011A610111] 作者简介：林玲，女，浙江纺织服装职业技术学院，宁波市先进纺织技术与服装 CAD 重点实验室，讲师，博士. 研究方 向：医用功能纺织品研究 （浙江 宁波 315211） PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建  第 1 期第 2 页  林  玲：载银纤维的抗耐药菌性能研究  2013 年 3 月  用冷却的无菌吸头从感受态细胞悬液中各取 200 l 转移到无菌的微量离心管中，每管加入 pcDNA3.1 1 l，轻轻旋转以混匀内容物，在冰中放置 30 分钟中后放到预加温到 42的循环水浴中放好的试管架上， 不要摇动试管。恰恰 90 秒后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 1-2 分钟。然后在每管中加入 800 l LB 培养液。用水浴将培养基加温至 37，然后将管转移到 37摇床上，温育 45 分钟使细胞复苏。最后将 适当体积已转化的感受态细胞转移到含 Amp 抗生素的琼脂培养基上，等平板置于室温直至液体被吸收后 倒置平皿，于 37培养，12-16 小时后观察到出现的菌落，证实获得了含有 pcDNA3.1 的耐药菌。 1.2.3 载银纤维对质粒转化的影响 在 1.2.2 质粒转化过程中，用冷却的无菌吸头从感受态细胞 E.coli DH5 菌株悬液中各取 200 l 转移 到无菌的离心管中，每管加入制备的质粒 DNA 1 l，轻轻旋转以混匀内容物，在冰中放置 30 分钟。在此 过程中分别设立对照组和实验组。在实验组中，在离心管内除了加入细胞悬液、质粒 DNA 外，再加入一 定量的载银纤维；对照组微量离心管内仅有细胞悬液和质粒 DNA。然后按照 1.2.2 所述的剩余步骤进行 试验。 1.2.4 抗菌定量试验 [3-4] 首先将载银纤维在紫外灯下光照灭菌 30 分钟，然后取细菌平皿中单个菌落与 5ml 含 Amp 抗生素营养 肉汤中 6h 成菌悬液。将 150mg 载银纤维加入到 200ml 含 5%Amp 抗生素 PBS 的三角烧瓶内，加入 100 l 菌悬液，作为实验组置于恒温振荡器上以 300rpm 振荡过夜。取 0.05ml 和 0.1ml 振荡后