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4 .共轭亚油酸的生物合成 生物合成法是采用特定的酶或微生物催化相应的底物生成CLA 。用亚油酸异构酶催化亚油酸生成9c , l11t -18 : 2 异构体。厌氧的瘤胃细菌和兼性厌氧的乳酸菌均具有将亚油酸转化为CLA 的能力。用乳酸菌SP 培养液催化亚油酸,生成CLA 的浓度可达7mg / g ,而且产物中9c , 11t 一18 : 2 异构体占总CLA 的含量达96%以上。在亚油酸浓度为1mg / mL 的发酵液中加人嗜酸乳酸菌(Lactobacillus aci dophilus )进行发酵,37 ℃ 发酵24h ,生成的CLA 含量达到8.247 μg / mL 。CLA 的生物合成法与化学合成法相比具有选择性合成的优势,可得到生理活性较高的9c , 11t 一18 : 2 高纯度异构体,避免了化学合成法生成复杂的CLA 异构体混合物而带来的分离和纯化上的困难。 5 .共轭亚油酸的检测技术 ( 1 )紫外分光光度法利用共轭亚油酸含有共轭双键,在234nm 处有特征吸收峰而亚油酸在此波长范围没有特征吸收峰这一特性,可检测CLA 的存在及含量。 ( 2 )银离子高效液相色谱法是分离饱和度不相同的同系物的有效方法。在高效液相色谱柱流动相中添加银离子后,可降低不饱和双键化合物的保留时间。银离子是电子接受体,能选择性地与化合物的双键作用,形成银的二键配合物,从而改变化合物的存在形式和分配平衡浓度,使其亲水性增强,保留时间缩短。这种亲和能力和极性的差异导致化合物在固定相和流动相中的分配特性不同,提高了分析灵敏度和分离的选择性,可把大部分共轭亚油酸异构体分开。 ( 3 )气相色谱法是分析检测脂肪酸的传统方法,具有快速、高效、灵敏等优点。该法需将脂肪酸转化成非极性的挥发性衍生物,如脂肪酸甲酷。甲酷化试剂有BF3/甲醇、H2SO4 /甲醇、HCI /甲醇等。 ( 4 )气质联用法色谱法对分析检测混合物具有独特的分离功能,但对未知物质的定性分析需用标准品作对照,缺乏标准品则检测难以进行。质谱法则具有定性分析的特殊作用。将气质联用法(GGMS )用于CLA 的分析检测,可综合两法的分析技术优势,检测结果准确可靠。 ( 5 )核磁共振波谱法核磁共振波谱法是基于元素的原子核在很强的外磁场作用下,发生能级分裂,对相应能量的电磁辐射产生共振吸收现象而建立起来的分析方法。13c 核磁波谱法用于鉴定和定量CLA 混合物中的同分异构体,结果与GC-MS 法一致。核磁共振的优点是可对CLA 混合物中不同构象的同分异构体进行定量测定。 6 .共轭亚油酸的应用前景 随着CLA 对人体健康影响的作用机制被逐渐揭示,CLA 作为一种新发现的营养素,无论是作为药品、保健食品、功能食品、食品防腐剂,还是在肉类工业、饲料工业中均具有重要作用。高纯度的CLA 活性异构体用于临床,对癌症、高血压、动脉硬化、血栓等一系列困扰人类健康与生存的疾病将产生显著疗效。动物实验表明CLA 在食品中的有效浓度为0.1 %一1.0 % ,而目前人类通过牛乳和牛肉摄取少量的CLA 还达不到CLA 的疗效剂量,生产高纯度的CLA 作为营养成分添加到食品中是非常必要的。对CLA 在动物体内的迁移和转化的研究表明:CLA 可有效地从饲料迁移到蛋黄中,但各异构体的迁移率有差异。CLA 的钠盐、钾盐可抑制霉菌生长,在食品、化妆品工业中可代替苯甲酸钠作防腐剂。CLA 作为饲料添加剂可提高动物对饲料中养分的转化率,在减少畜禽采食量的同时,显著降低胭体脂肪含量,并提高蛋白质含量及畜禽的免疫力。CLA 作为动物体内次生代谢天然产物,没有抗原性,理论上不存在使用量上限,因此CLA 具有十分广阔的应用前景。 四、γ-亚麻酸的制备技术 1 . γ-亚麻酸的应用 2 . γ-亚麻酸的生物来源 3 . γ-亚麻酸的分子蒸馏提纯技术 4 . γ-亚麻酸的检测方法 1 . γ-亚麻酸的应用 在临床上将GLA 用于防止冠心病和心绞痛、抑制血小板凝聚、抗高血压、治疗雷诺综合征所引起的血管痉挛、治疗糖尿病、降低胆固醇及抑制溃疡、胃出血、妇女经前期综合征及乳腺病、肥胖症等。GLA 降低胆固醇的作用是亚油酸的163 倍。GLA 在体内被转化成前列腺素而使褐色脂肪活化,达到减肥效果。GLA 具有抗黑色素生成作用,添加到护肤品中用于抗色素沉着。GLA 作食品营养补充剂具有广泛的应用前景。 2 . γ-亚麻酸的生物来源 月见草、紫草科植物玻璃苞及黑醋栗等是GLA 的植物来源。采用微生物发酵法是获取GLA 的又一重要途径。在已报道的微生物发酵制备GLA 的技术中,发酵用微生物菌种主要有被孢霉、雅致枝霉、雅致小克银汉霉、微小毛霉、高大毛霉等。 3 . γ-亚麻酸的分子蒸馏提纯技术 分子蒸馏(molecular dis
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