液相电喷雾离子化质谱在DNA加合物检测中的应用进展.pdfVIP

·７０６· 中国药理学与毒理学杂志２０１２年１０月第２６卷第５期　ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ，Ｖｏｌ２６，Ｎｏ５，Ｏｃｔ２０１２ 液相电喷雾离子化质谱在ＤＮＡ加合物检测中的应用进展 邢国振，栾　洋，任　进 （中国科学院上海药物研究所 药物安全性评价研究中心，上海 ２０１２０３） 　　摘要：ＤＮＡ加合物是一种判断ＤＮＡ损伤的重要的生物标志物。对于某些特殊ＤＮＡ加合物的检测不仅能够获取个体对 ３２ 于这些化合物的接触情况，而且还可以判断其可能产生的效应。ＤＮＡ加合物有许多检测方法，如 Ｐ后标记法、免疫法和液 相／气相质谱联用法等等。随着液相质谱偶联技术（ＬＣＭＳ）的发展，离子化方法尤其是电喷雾离子化（ＥＳＩ）方法在技术上的 突破以及离子发射和检测技术的进步，ＬＣＭＳ可以检测暴露外源遗传毒性化合物后与动物和人组织ＤＮＡ形成的加合物水平。 本文就ＬＣＥＳＩＭＳ液相质谱联用技术在检测碱基、核苷和核苷酸ＤＮＡ加合物方面的应用做一简述。 关键词：ＤＮＡ加合物；光谱法；质量；电喷雾电离 中图分类号：Ｒ９９　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１０００３００２（２０１２）０５０７０６０５ 　　ＤＯＩ：１０．３８６７／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００３００２．２０１２．０５．０２１ 　　体内外环境中存在的反应性化合物或者其活性代谢产 离子而不发生断裂，这样可将（ｍ／ｚ）降低到各种不同类型的质 物能与 ＤＮＡ发生共价结合形成加合物。ＤＮＡ加合物是 量分析仪都能检测到的程度。 ＤＮＡ化学损伤最重要和最普遍的形式之一，它既作为接触标 三重四级杆质谱质量分析仪的构造允许做串联质谱分 志物反映毒物在靶部位的效应剂量，又可以作为效应标志物 析（ＭＳ／ＭＳ），第１个四级杆（Ｑ１）和第３个四级杆（Ｑ３）用于 反映ＤＮＡ的损伤程度。如果形成加合物的ＤＮＡ不能及时 质量分析，起滤过作用。第２个四级杆（Ｑ２）是碰撞室，内充 修复就会导致基因发生突变，诱发癌变。因此，ＤＮＡ加合物 满惰性气体（多数是氩气）。在碰撞室，目的离子可以进行碰 具有重要的生物学意义。ＤＮＡ加合物研究中的一个主要困 撞诱导解离（ｃｏｌｌｉｓｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ＣＩＤ）。 难在于如何用少量的ＤＮＡ（ｍｇ以下）准确又特异地检测出 目前主要有两种检测模式应用于ＤＮＡ加合物检测：单 遗传致癌物在特殊人群（特殊职业暴露、环境暴露、饮食习惯 离子监测（ｓｉｎｇｌｅｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ，ＳＩＭ）和选择反应监测（ｓｅｌｅｃｔ 和生活方式不同的人群）中所形成的ＤＮＡ加合物。自从２０ ｅｄｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ，ＳＲＭ）或多反应监测（ｍｕｌｔｉｒｅａｃｔｉｏｎｍｏ ［１］ 世纪６０年代 Ｌａｗｌｅｙ和Ｂｒｏｏｋｅｓ 提出许多化学致癌物可以 ｎｉｔｏｒｉｎｇ，ＭＲＭ）。ＳＩＭ模式检测离子时，选择的目的离子通过 与ＤＮＡ发生共价结合以来，发展了许多ＤＮＡ加合物的检测 Ｑ１，Ｑ２和Ｑ３，不做任何其他处理，主要的选择功能体现在 ３２ 方法，其中有 Ｐ后标记方法、免疫学方法、荧光检测法和色 Ｑ１上。与之不同的是，在 ＳＲＭ模式检测时，选择的母离子 谱质谱联用方法等等［２－３］。随着技术革新和广泛应用，液相 化合物通过Ｑ１进入Ｑ２，在 Ｑ２内进行 ＣＩＤ形成特征性的目 色谱质谱联用技术，特别是液相色谱电喷雾离子化质谱联 的离子化合物，然后再被Ｑ３检测。如果想要得到特征性强 用技术越来越多地应用到了ＤＮＡ加合物检测。由于其检测 而且丰度高的离子产物，ＳＲＭ模式是理想的选择。因为 灵敏度高，特异性强，能够提供加合物结构信息等，现在已成 ＳＲＭ模式降低了溶剂和基质的干扰，再与ＣＩＤ联合使用后可 为主要的ＤＮＡ加合物检测方法之一。