百脉根乙醇脱氢酶基因LjADH1 的克隆, 表达及酶特性分析.pdfVIP

1111111111 11111 豆科基因组学与遗传学(网络版), 2011 年, 第2 卷, 第31-39 页 Douke Jiyinzuxue Yu Yichuanxue (online), 2011, Vol.2, 31-39 研究论文 Research Article 百脉根乙醇脱氢酶基因LjADH1 的克隆、表达及酶特性分析 曾拓 1,2,3 , 柳参奎 2 , 罗汝叶 1,3 , 巩鹏涛 2,3 , 赵德刚 1 , 方宣钧 1,2,3 1. 贵州大学生命科学院, 贵州省农业生物工程重点实验室, 贵阳, 550025 2. 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心, 哈尔滨, 150040 3. 海南省农作物分子育种重点实验室, 海南省热带农业资源开发利用研究所, 三亚, 572025 通讯作者: xuanjunfang@; 作者 豆科基因组学与遗传学, 2011 年, 第 2 卷, 第 5 篇 DOI: 10.5376/.2011.02.0005 收稿日期：2011 年 04 月 28 日 接受日期：2011 年 06 月 09 日 发表日期：2011 年 06 月 28 日 本文首次以英文发表在 Legume Genomics and Genetics 上。现依据版权所有人授权的许可协议，采用 Creative Commons Attribution License 对其 进行授权，用中文再次发表与传播。只要对原作有恰当的引用，版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。如果读者对中文含义理解有歧 义，请以英文原文为准。 建议的引用格式如下： Zeng et al., 2011, Cloning and Expression of An Alcohol Dehydrogenase from Lotus japonicus and Characterization of LjADH1, Legume Genomics and Genetics(online), Vol.2 No.2 pp.6-13 (DOI: 10.5376/lgg.2011.02.0002) + + 摘 要 乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase ADH)是一种广泛分布在生物体中的酶，通常以 NAD 和 NADP 为辅酶，乙醇脱 氢酶在植物的生长、发育和抗逆性中都发挥着重要的作用。本研究用原产于日本宫古岛的二倍体百脉根(Lotus japonicus) MG20 为材料，借助ADH 基因的保守性在百脉根 cDNA 中克隆同源基因，并对基因进行表达与酶特性分析。该基因全长为 1 143 bp，编码了 380 个氨基酸。同源比对结果表明，该序列编码蛋白的氨基酸序列和 ADH 类蛋白具有较高同源性，推测 属于锌结合乙醇脱氢酶家族蛋白，我们将其命名为 LjADH1 。将该基因连结到原核表达载体pQE30 和真核表达载体 pYES2 ， 构建成 pQE30-LjADH1 和 pYES2-LjADH1 ，并且分别转入大肠杆菌 M15 和酵母 INVScl 中。通过对诱导条件的优化，在大 肠杆菌中表达了具有乙醇脱氢酶活性的 His 融合重组蛋白，表达量为 1.12 mg/mL，酶活性48.2 U/mg 。通过在原核和真核的 抗逆性研究，我们发现该基因 LjADH1 融合蛋白的过量表达提高了原核重组菌株对过氧化氢的抗性。在 CuCl 、CdCl