转基因红花中角质细胞生长因子KGF-1 的表达.pdfVIP

11 1 植物学报 Chinese Bulletin of Botany 2011, 46 (3): 311–318, doi: 10.3724/SP.J.1259.2011.00311 ·研究报告· 转基因红花中角质细胞生长因子KGF-1的表达 1, 2 1, 3 1 1, 3 1, 3 1, 3 1, 3* 堃1* 江莺 , 刘秀明 , 马吉胜 , 李巍 , 朱海林 , 杜美丽 , 李海燕 , 李校 1吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心, 长春 130118; 2 吉林农业大学中药材学院, 长春 130118 3 吉林农业大学生命科学学院, 长春 130118 摘要 通过构建重组表达质粒载体p139035S-KGF1和根癌农杆菌介导在红花(Carthamus tinctorius)中表达角质细胞生长 因子(KGF-1)。从侵染到诱导生根共需要14周, 转化率达0.1% 。红花子叶在潮霉素筛选培养基上培养4–5周后便可获得丛生 芽, 再生芽移入含潮霉素的伸长生根培养基, 培养4–8周可诱导生根。通过PCR、Southern blot、RT-PCR及Western blot 检测证明目的基因KGF-1 已经整合到红花细胞的染色体中, 实现了KGF-1外源蛋白在红花中的成功表达, 为开发KGF-1蛋 白新的生产途径奠定了基础。 关键词 根癌农杆菌, 角质细胞生长因子, 转基因红花 江莺, 刘秀明, 马吉胜, 李巍, 朱海林, 杜美丽, 李海燕, 李校堃 (2011). 转基因红花中角质细胞生长因子KGF-1的表达. 植物学报 46, 311–318. 近年来, 植物生物反应器以其生产成本低、安全、 红花是油药两用作物, 干燥管状花是一味常用中药, 易规模化生产等优点, 为世界科学研究的发展创造了 性辛、温, 具有活血通络、祛瘀止痛的功效。红花含 新的机遇。Rybicki(2009)认为植物比细菌、酵母(或 有丰富的红花黄色素和少量的红色素, 是一种天然的 昆虫)和哺乳动物细胞等反应器系统更有开发潜力。 食用色素。红花籽油中亚油酸是高级烹饪油且广泛用 植物表达的大量重组蛋白已经进行临床试验, 其中少 于医药和化工工业。目前红花组织培养有器官发生途 数已经市场化生产。自从1986年转基因植物被批准进 径和体细胞胚途径。利用器官发生途径形成红花再生 入田间试验, 到1997年1月31 日, 据美国农业部动植 植株包含2种方式, 一种是器官发生直接途径, 即在 物检疫局(APHIS)的统计数据, 美国已批准的转基因 外植体上直接分化出芽; 另一种是器官发生间接途 植物田间试验达2 584例。Calgene公司研制的延熟番 径, 即外植体先形成愈伤组织, 再进行芽的分化(李 茄FLAVRSAVRTM于1994年被批准商业化。截止 爱新等, 2006; Radhika et al., 2006)。在转基因红花 1997年1月31 日, 被批准商业化的转基因植物美国有 方面, 早在20 多年前美国就已成功获得转基因红花 17例, 加拿大18例, 澳大利亚4例, 日本7例。我国也 (Ying et al., 1992)。2008年, 加拿大SembioSys生物 于1997年上半年批准了转基因延熟番茄的商业化(贾 工程公司申请了专利, 利用北美洲普遍栽培的高产油 士荣, 1997)。2001年, 我国已有10余种转基因植物进 料作物红花成功生产出“红花子来源人胰岛素”, 并 入田间试种, 有6种转基因植物被批准商品化生产(沈 在2009年顺利通过动物药理实验与I期和II期临床试 桂芳等, 2001)。到2005年, 抗虫棉、耐贮