猪A组轮状病毒Vp7基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果的检测.pdfVIP

猪A组轮状病毒Vp7基因工程乳酸菌的制备及其免疫效果的检测 摘要 一。由于目前尚无治疗轮状病毒的特效药物，因此预防显得尤为重要。为此，世界卫生 组织多次呼吁各国科学家研制开发有效的轮状病毒疫苗，并将其列为最优先发展的疫苗 项目之一。随着分子生物学研究的不断深入，现己明确VP7是RV的主要外壳蛋白和保 护性抗原之一，在疫苗的研制中具有重要的意义。 本实验选择乳酸菌作为受体菌株表达外源基因Vp7，即可将乳酸菌的益生功能和外 源基因的特异性免疫相结合，从而研制猪轮状病毒Vp7基因工程乳酸菌。目的在于为开 发研制预防猪轮状病毒病的基因工程乳酸菌口服疫苗奠定实践基础。 在本研究中，将猪A组轮状病毒主要保护性抗原Vp7克隆至可在大肠杆菌和乳酸 菌中穿梭表达的具有红霉素和胸苷酸基因的双标记表达载体。经过优化电转化条件，将 重组质粒pW425et-Vp7转化到乳酸菌受体菌中，通过乳酸菌质粒的提取，酶切分析和 PCR方法鉴定阳性克隆质粒。将筛选好的阳性克隆进行SDS—PAGE及Western bloting检 检测血清抗体和SIgA的水平。另外，免疫后每隔10天，采用