无色孔雀石绿、环丙沙星和四环素残留的分析检测.pdfVIP

Turbo Flow 联合 LC-MS/MS 方法进行食物样品中孔雀石绿、 无色孔雀石绿、环丙沙星和四环素残留的分析检测 简介： 为了保证食物供应链的安全性和全球健康风险管理的有效性，对食品和农产品中化学物 质残留水平进行精确的检测是非常必要的。而化学物质的残留分析要求检测技术具有足够高 的灵敏度，能够在污染物的最大检出限（MRL）或最大检出限（MRL）水平以下从给定样品中 检出被污染物并对其进行定量。另外，因为食品安全相关规定日益严格，所要检测的样品数 量也在不断增大，因此分析技术是否具备高通量处理样品的能力也是非常关键的。 随着水产业持续快速的发展，人们对水产养殖过程中未批准药物和不安全化学物质的使 用也越来越关注。孔雀石绿 （MG），是一种三苯甲烷类人工合成有机化合物，既是染料，也 是高效杀菌剂，而且价格低廉。因此它在水产养殖过程中被广泛使用，特别是在亚洲地区。 （孔雀石绿、无色孔雀石绿的化学结构式见图 1） 图 1 孔雀石绿、无色孔雀石绿的化学结构式 孔雀石绿 （MG）在代谢过程中降解成无色孔雀石绿 （LMG），研究发现：无色孔雀石绿在 含脂肪的鱼的器官中会发生累积现象，因为人们在已经检测不到孔雀石绿的样品中仍然会发 现无色孔雀石绿的残留。而研究证明，无论是孔雀石绿还是无色孔雀石绿,都有潜在的致癌 活性。因此，在许多国家，包括美国、加拿大和欧盟，孔雀石绿已经被禁止作为兽用药在水 产养殖业使用。因为一些化学物质被禁止在动物肉类加工制作的食品中使用，欧盟法规规定 了这些物质的最低允许限量（MRPL）。鱼肉中有关孔雀石绿和无色孔雀石绿的残留总量的最 低允许限量为2 μg/kg （ppb）。 环丙沙星是一种广谱性抗菌素 （化学结构式见图 2），属于氟喹诺酮家族的成员之一。 氟喹诺酮类是近年来人工合成的一系列新型杀菌性抗菌药物,因其抗菌谱广、抗菌活性强等 特点而广泛应用于畜禽饲养业和水产养殖业的多种感染性疾病的防治当中。然而,食品中氟 喹诺酮类残留会诱导人类致病菌产生耐药性。因此,随着氟喹诺酮类药物在动物源性食品中 的广泛应用,其残留问题越来越引起社会各界的广泛关注和有关部门的高度重视。FDA 禁止 动物食品中氟喹啉的超标使用。欧盟法规规定氟喹诺酮类药物—恩诺沙星及其代谢产物环丙 沙星的总量在所有生产食品的动物肌肉和猪肝脏中的最大残留限(MRLs)分别为 100μg/kg （ppb）和200 μg/kg （ppb）。 图 2 环丙沙星的化学结构式 四环素是一种聚酮类抗生素，它对一些革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌具有高效作用 （化 学结构式见图 3）。和其他兽用抗生素一样，四环素用于食用动物后，在动物体内和畜禽产 品中会有残留现象，残留的四环素同样会使得人们对这些药物的耐药性提高。欧盟兽药残留 也对此作了相关规定，四环素在所有生产食品的动物肌肉和猪肝脏中最大残留限(MRLs) 分 别为 100μg/kg （ppb）和300 μg/kg （ppb）。 图 3 四环素的化学结构式 Thermo Scientific 针对以上残留检测需求提出了相应的解决方案--Aria TLX 系统，该 系统是将 Turbo Flow 技术与 TSQ Quantum Access 质谱技术进行完美结合。它为 LC-MS/MS 质谱配置了在线样品提取功能，与传统的脱机提取方法相比，该方法进行食品中化学物质残 留分析更快捷，更可靠。Turbo Flow 技术通过扩散溶解、尺寸排阻、柱层析技术将蛋白等 一些大分子物质滤掉，将小分子保留。工作人员可以直接注射检测样品进入 LC-MS 系统进行 分析，大大的简化了样品制备过程，并提高了检测通量。 研究 目标： 验证该技术与液液提取或固相萃取等传统技术相比具备的以下优势：样品分析所需的总 时间减少了，同时降低了食品中的离子抑制和基质效应的影响。 实验条件： 1．样品制备 乙腈提取法：虾（具头）、罗非鱼和猪肝脏分别各称取3～4g，与 30ml 乙腈充分混匀， 室温放置 10min，上层液体被移入到 0.22µm 的微孔离心管中，10000rpm 离心 10min，转移 上清到 50mL 玻璃闪烁瓶中，即为制备的样品。该样品制备过程总共需要 25min。 标准溶液配制：1mg/L 的孔雀石绿、无色孔雀石绿、环丙沙星、四环素混合溶液为储存 溶液，用甲醇将