圆二色光谱分析蛋白质构象的方法及研究进展-圆二色光谱分.pdfVIP

维普资讯 第 32卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 评述与进展 第 3期 2004年3月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 388—394 圆二色光谱分析蛋白质构象的方法及研究进展 沈星灿 ， 梁 宏 何锡文 王新省 (广西师范大学化学化工学院，生物无机研究所 ，桂林541004) (南开大学化学系，天津300071) 摘 要 介绍了远紫外圆二色光谱数据计算蛋白质二级结构，辨认蛋白质三级结构类型的原理、拟合方法、实 验技术。对近紫外圆二色作为光谱探针，研究蛋白质中芳香氨基酸残基、二硫键微环境的变化作了简单介绍。 关键词 圆二色，蛋白质二级结构，蛋白质三级结构，评述 1 引 言 随着人们对生命科学的日益关注，分析化学的深入发展将越来越重视和加强生物分析。特别是人 类基因测序工程完成后，因生物、医学上的需要，使与蛋白质的相关研究成为生物分析中的重要课题。 自Kenew采用x一射线技术，首次揭示肌红蛋白的折叠结构以来，蛋白质的研究从氨基酸残基序 列的测定，深入到空间结构一构象的确定。近年来，人们发现疯牛病、克一雅 氏病和震颤病等神经退行性 疾病是由Prion病蛋白所致，而构象变化在Prion病蛋白的致病因素中起着至关重要的作用 [1．2】。这使 人们进一步认识到蛋白质的构象对其生理功能的巨大意义，要深入理解蛋白质的生物活性，就必须了解 它的构象及其相关变化。目前，确定蛋白质构象最准确的方法是x 一射线晶体衍射，但对结构复杂、柔 性的生物大分子蛋白质来说，得到所需的晶体结构较为困难。二维、多维核磁共振技术能测出溶液状态 下较小蛋白质的构象，可是对分子量较大的蛋白质的计算处理非常复杂。相比之下，圆二色 (Circular dichroism简称CD)光谱是研究稀溶液中蛋白质构象的一种快速、简单、较准确的方法。 1969年，Greenfield最早用 CD光谱数据估计 了蛋 白质的构象 J，相关 的研究方法陆续有报 道[4 。特别是近十几年来，用远紫外圆二色 (Far—uVCD)数据分析蛋 白质二级结构，不但在计算方法 和拟合程序上有了极大地发展 ¨3oJ，而且随着x一射线晶体衍射与核磁共振技术的提高，越来越多的蛋 白质的精确构象得到测定，为CD数据的拟合提供了更精确的数据库 卜 。研究者还发现用CD光谱 研究蛋白质三级结构具有独特优点，发展了用远紫外 CD光谱辨认蛋 白质三级结构的方法及相关程 序 ；此外，近紫外圆二色(Near—uVCD)作为一种灵敏的光谱探针，可反映蛋白质中芳香氨基酸残 基、二硫键微环境的变化 卜卵】。CD光谱技术作为研究溶液状态下蛋 白质或多肽构象的一种重要手段， 已受到研究者的广泛关注 】。本文就CD光谱技术分析蛋白质构象的基本原理、实验技术及其研究 进展做一评述。 2 蛋白质的圆二色性及其测量 2．1 蛋白质的圆二色性 蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的具有特定结构的生物大分子。蛋白质一般有一级结构、二 级结构、超二级结构、结构域、三级结构和四级结构几个结构层次 。在蛋 白质或多肽中，主要的光 活性基团是肽链骨架中的肽键、芳香氨基酸残基及二硫桥键。当平面圆偏振光通过这些光活性的生色 基团时，光活性中心对平面圆偏振光中的左、右圆偏振光的吸收不相同，产生的吸收差值，由于这种吸收 差的存在，造成了偏振光矢量的振幅差，圆偏振光变成了椭圆偏振光，这就是蛋白质的圆二色性。圆二 色性的大小常用摩尔消光系数差△ (M～ ·cm )来度量，圆二色性也可用摩尔椭圆度 [0]来度量，它 与摩尔消光系数差之间的换算关系式为： 2002-09-07收稿；2oo3 2．18接受 本文系国家自然科学基金(No．2026loo1)、广西 自然科学基金 (桂科青0339022)和高校优秀青年教师奖励计划资助项 目 维普资讯 第3期 沈星灿等 ：圆二色光谱分析蛋白质构象的方法及研究进展 [o2= ( )ln10