萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2 的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响.docVIP

氨基酸和生物资源 Amino Acids Biotic Resources 2001,23(1):45 ~ 47 · 45 · 萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL- 2的 分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响* 陈小君, 冯翠萍, 梅承恩 刘 昕 (中山医科大学肿瘤研究所, 广州510060) (中山大学生命科学学院, 广州510275) 摘要: 目的: 探讨萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响?方法:实验小鼠随机分成实验组（低剂量组4 g/kg/d；高剂量组:8 g/kg/d）和对照组（与实验组用同体积的生理盐水）,连续用药10天?用3H—TdR掺入法进行检测?结果:与对照组相比萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2分泌有明显促进作用并能明显提高小鼠脾淋巴细胞转化增殖,并有一定的量效关系?结论:萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠免疫功能有明显的促进作用,这可能与其促进细胞因子的分泌和淋巴细胞转化增殖有关? 关键词: 萌动激活/赤灵芝孢子粉; 3H—TdR法; IL-2; 淋巴细胞转化增殖 中图分类号: R967 文献标识码: A 文章编号: 1006-8376(2001)01-0045-03 灵芝孢子(The spores from Ganoderma lu- cidum Karst) 是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来的象淡雾状的极其微小的孢子,具有灵芝的全部遗传活性物质?以往的研究表明,灵芝孢子粉有抗病抗衰老作用;灵芝对机体的免疫功能具有调节作用[2-7]?灵芝孢子粉亦能全面提高小鼠的免疫功能,增强机体的抗病能力[1]?本文首次用萌动激活的赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2(白细胞介素-2)的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响进行研究,从而进一步探讨灵芝孢子粉的免疫调节功能的机理,为临床应用提供依据? 1 材料和方法 1.1 实验动物 试验用NIH小鼠,由广东省卫生厅实验动物中心提供? 鼠重20 ~ 22g, 雌雄各半?C57BL/6J小鼠(8周鼠龄)由广东省卫生厅实验动物中心提供? 1.2 药物与试剂 萌动激活赤灵芝孢子口服液(0.2 g/ml)由中山大学国家教育部食品工程研究中心及广州绿色盈康生物工程有限公司提供?ConA, PHA为Sigma产品；3H(TdR：中科院北京原子能所,比活性20 Ci/mmol; 1.3 实验方法 随机将小鼠分成实验组(低剂量组?高剂量组)和对照组,每组10只,低剂量 组和高剂量组每天剂量为4 g/kg和8 g/kg,对 照组口服同体积的生理盐水,连服10天? 1.3.1 小鼠脾细胞对丝裂原增殖反应: 3H( TdR掺入法[9],实验时将NIH小鼠处死后,用75%酒精浸泡小鼠片刻,无菌取出小鼠脾脏,将脾脏研成细胞悬液,过200目不诱钢筛,计细胞数,调整细胞浓度为1×107/ml的脾细胞悬液?取脾细胞悬液50 μ1(5×105细胞)加入96孔平板中,加Con A2 μg/孔,或PHA 20 μg/孔,平行样3份置于37 oC,5%CO2孵育箱中培养72h,终止培养前6h每孔加入0.5 μ1 Ci 3H-TdR,多头细胞收集器收集细胞,液闪计数仪测量?3H—TdR掺入? 1.3.2 IL-2待测样品的制备和活性测定: 取实验的 NIH 小鼠脾细胞悬液50 μ1, 加入24孔板,对照组和实验组（低剂量组和高剂量组）分 * 收稿日期:2000-11-07 作者简介:陈小君(1936- ), 女, 中山医科大学教授, 主要从事抗癌药物药理学和肿癌生物学研究? · 46 · 陈小君, 等. 萌动激活赤灵芝孢子粉对小鼠脾细胞IL-2的分泌和脾淋巴细胞转化增殖的影响 别加3个平行样,然后,分别加入ConA 3 μg/ ml和脾细胞数为5×105/ml,每孔总体积为1 ml,将培养板置37 oC含5%CO2培养箱中培养24h后,收集上清液即为含IL-2的待测样品?C57BL/6J小鼠8周鼠龄,先无菌制备细胞悬 液,计数细胞后,调整细胞浓度为2～3×105/ ml,加入ConA 3 μg/ml,置37 oC含5% CO2培养箱中培养72h,用淋巴细胞分离活化好的淋巴 母细胞,即为活化小鼠脾细胞,作为测定IL-2 的靶细胞?用淋巴细胞分离液分离和活化小鼠脾细胞,用培养液洗三次后,用10%新生牛血 清加1640培养液将细胞浓度调为1×106/ml, 将100 μg细胞悬液和1:3稀释的待测样品 10 μ1加入96孔板中,置37 oC,5% CO2培养箱 中培养24h,培养结束前4h加3H—TdR 0.