人重组血管内皮抑素金纳米壳层对血管内皮细胞和肺腺癌细胞的作用研究.pdfVIP

暨南大学硕士论文 人重组血管内皮抑素金纳米壳层对血管内皮细胞和肺腺癌细胞的作用研究 中文摘要 目的 研究在820nm 波长近红外线（near-infrared, NIR ）照射下人重组血管内 皮抑素/金纳米壳层（Gold Silica Nanoshell-rhEndostatin, G-rhES ）对血管内皮细 胞株ECV304 及肺癌细胞株A549 增殖抑制和诱导凋亡作用。 方法 使用自组装-化学镀法制备金纳米壳层，对其表面修饰，并通过Au-S 键 直接连接人重组血管内皮抑素（rhEndostatin, rh-ES ），合成G-rhES ；MTT 法检 测 G-rhES 对血管内皮细胞及 A549 细胞的增殖抑制作用；经流式细胞仪(flow cytometry, FCM) Annexin-V FITC/ PI 双染法检测细胞凋亡；原子力显微镜（atonic force microscope, AFM ）观察细胞表面形态变化。 结果 （1）用自组装-化学镀法在氧化硅纳米颗粒表面有效地包覆连续、完整 的金壳壳层，通过其表面修饰并连接rh-ES ，聚乙二醇（PEG ）封闭壳层表面的 非特异性位点，提高G-rhES 生物相容性；（2 ）rh-ES 对ECV304 细胞有明显抑 制作用，并呈时间和剂量依赖性；对A549 细胞增殖亦有抑制作用。单纯金纳米 壳层组对ECV304 细胞和A549 细胞增殖均无明显影响，而经820nm NIR 照射的 金纳米壳层组对细胞增殖有抑制作用，呈浓度依赖性。在 820nm NIR 照射下 G-rhES 组对 ECV304 和 A549 细胞增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;与 rh-ES 组比较，有统计学差异。820nm NIR 照射下G-rhES 与顺铂对A549 细胞有 协同杀伤作用；（3 ）流式细胞仪检测结果表明rh-ES 可以明显诱导ECV304 细 胞凋亡，而在820nm NIR 照射下G-rhES 不但诱导ECV304 和A549 细胞凋亡， 而且可直接杀灭细胞，并呈浓度依赖性；（4 ）AFM 探测表明经rh-ES 处理后的 ECV304 细胞伪足较前有减少，出现的表面孔洞较小。形态变化不明显，细胞整 体构架仍存在，在 820nm NIR 照射下分别经单纯金纳米壳和G-rhES 处理后， ECV304 和A549 细胞整体结构破坏明显，胞膜表面出现大小不等的孔洞，伪足 消失，细胞质流出。 结论 通过自组装-化学镀法成功合成金纳米壳层，并对其表面修饰和改性， 连接靶向药物rh-ES 。rh-ES 对 ECV304 有明显抑制作用，并呈时间和剂量依赖 性；rh-ES 对A549 细胞亦有抑制作用；单纯NIR 照射对ECV304 和A549 无明 显影响；纳米壳层在820nm 波长NIR 照射下，示对ECV304 和A549 有杀伤作 I 暨南大学硕士论文 人重组血管内皮抑素金纳米壳层对血管内皮细胞和肺腺癌细胞的作用研究 用，其机制与其吸收近红外线产生热量诱导细胞凋亡以及直接杀灭细胞有关；未 照射下则对细胞增殖无抑制作用，表明金纳米壳层具有良好的生物兼容性。在 NIR 照射下金纳米壳层与顺铂有协同杀伤细胞作用，其可能与产热增加化疗药的 细胞毒性有关。细胞表面局部结构探测提示rh-ES 对ECV304 具有靶向作用，可 能通过表面受体发挥其作用；而在 NIR 照射下单纯金纳米壳层和 G-rhES 对 ECV304 和A549 是非特异性杀伤作用。 关键词 金纳米壳层；人重组血管内皮抑素；近红外线；A549 细胞；ECV304 细胞 II 暨南大学硕士论文 人重组血管内皮抑素金纳米壳层对血管内皮细胞和肺腺癌细胞的作用研究 Abstract Objective To stu