GnRH脉冲模式对FSH.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(3): 275−278 技术与方法 GnRH 脉冲模式对FSH 分泌的影响 1,2 3 2 3*　韦旭斌4* 王　新 　谭建华 　赖小平 　万忠海 1 2 ( 青岛农业大学动物科学技术学院, 青岛 266109; 广州中医药大学中药学院, 广州 510006; 3 4 解放军军事医学科学院军事兽医研究所, 长春 130062; 吉林大学畜牧兽医学院, 长春 130062) 摘要　　本文目的是进行GnRH 脉冲模式对FSH 分泌影响的研究。用GnRH 以不同的脉冲振 幅、不同的频率对GTH 细胞进行刺激后, 检测FSH 的24 h 分泌量。结果表明, FSH 的24 h 分泌 量, 以频率为120 min、振幅20 nmol/L 时的GnRH 脉冲模式为最高, 并且随着GnRH 刺激频率的增 快或减慢, FSH 的分泌量均呈逐渐减少趋势。所以, GnRH 脉冲频率本身就是一个调控信号, 不同 脉冲频率GnRH 对FSH 表达有着明显不同的影响, 在相同振幅条件下, 低频脉冲刺激(120 min 间 隔) 时FSH 的分泌达到高峰。 关键词　　FSH; GnRH; 脉冲 成年动物的生殖能力主要依赖于下丘脑-垂体- ELISA 检测试剂盒(RapidBio Lab); RPMI 1640 培养 性腺轴的建立和完善, 垂体处于轴系的中间环节, 分 基(Gibco); 酶标仪(Tencan); 生物安全柜(Thermo 泌的垂体促性腺激素(gonadotrophic hormone, GTH) Forma); CO2 细胞培养箱(Kendro) 。 是参与生殖的重要激素。促性腺激素细胞分泌的促 1.2 方法 卵泡激素(follicle stimulating hormone, FSH)和黄体生 1.2.1 垂体前叶细胞的体外原代培养 参考 成素(luteinizing hormone, LH)在哺乳动物生殖调控中 Guillemin[9] 的方法做适当修改。取大鼠, 麻醉, 心脏 占据中心地位, 它们一方面与性腺内各自受体结合, 采血后断头, 将头浸于 75% 的酒精中消毒。在生物 直接参与性腺功能的调控, 另一方面又接受中枢神经 柜中, 打开颅骨找到脑垂体, 挑去神经垂体, 取出腺 系统和内分泌系统的调节。长期以来, 国外很多学 垂体, 将其放入4 ℃的5 ml 0.3% BSA-CMF Hanks 液 者如 Childs [1] 、Burger [2] 、Shrim[3] 、Reichler [4] 、 中。用0.3% BSA-CMF Hanks 漂洗 2 次, 剪成不大 Lisowski[5] 、Lopot[6] 、Bastings[7] 、Weiner [8]等在相 于 1 mm×1 mm×1 mm大小的腺垂体肉糜。以 1 000 r/min 关方面已经做了大量研究。促性腺激素释放激素 离心 5 min, 沉淀用2 ml 0.25% 胶原酶 II-CMF Hanks (gonadotropin-releasing hormone, GnRH)是由下丘脑 液重新悬浮, 吹打。将离心管放入37 ℃, 5% CO2 培 神经元分泌