微生物研究毕业论文答辩.pptVIP

课题研究方法 3 生物学及酶学性质研究 Mhy-1脂肪酶的最适作用温度： 在20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、60℃、70℃、80℃作用范围内进行酶活测定。 课题研究方法 3 生物学及酶学性质研究 Mhy-1脂肪酶的最适作用温度 课题研究方法 3 生物学及酶学性质研究 Mhy-1脂肪酶的最适作用pH： 用pH值为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0的缓冲液配置不同pH的底物，进行酶活测定。 课题研究方法 3 生物学及酶学性质研究 Mhy-1脂肪酶的最适作用pH 课题研究方法 3 生物学及酶学性质研究 Mhy-1脂肪酶的热稳定性研究： 取1mL酶液分别置于20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃恒温水浴处理60min, 进行残留酶活力测定。 课题研究方法 3 生物学及酶学性质研究 Mhy-1脂肪酶的热稳定性研究 课题研究方法 3 生物学及酶学性质研究 Mhy-1脂肪酶的pH稳定性研究： 按酶液：缓冲液体积比1:1，将酶液分别置于pH值为4、5、6、7、8、9、10的缓冲液中,放置在低温环境中2小时后，测定各pH值下的残余酶活。 课题研究方法 3 生物学及酶学性质研究 Mhy-1脂肪酶的pH稳定性研究 课题研究方法 4 脂肪酶的应用—催化合成生物柴油 制取生物柴油的方法： 基本的反应体系含有油、醇、有机溶剂和脂肪 酶,在50mL具塞锥形瓶中,40℃密闭振荡反应,分段补加醇类，一段时间后进行取样分析。 产物的分析的方法 产物的分析采用气相色谱分析法。 课题研究方法 4 脂肪酶的应用—催化合成生物柴油 Mhy-1样品的气相色谱图 课题研究方法 4 脂肪酶的应用—催化合成生物柴油 Mhy-1的转酯分析 时间（min） 15.16 16.30 16.72 18.30 18.65 18.92 20.09 20.28 20.36 20.67 25.30 酯的含量 1.4% 5.87% 0.86% 0.46% 0.4% 0.2% 0.21% 0.27% 0.3% 0.44% 0.22% 课题研究方法 4 脂肪酶的应用—催化合成生物柴油 其中在16.30min中时生成的酯为油酸甲酯，其百分含量达到5.87%。总的转酯率达到10.71%。另外，在21.99min中时生成了副产物，其为角鲨烯，百分含量高达42.99%，其具有很高的商业价值。 课题研究方法 4 脂肪酶的应用—催化合成生物柴油 角鲨烯是一种脂质不皂化物，最初是从鲨鱼的肝油中发现的,是一种无毒性的具有防病治病作用的海洋生物活性物质。 1、保肝作用，促进肝细胞再生并保护肝细胞，从而改善肝脏功能。 2、抗疲劳和增强机体的抗病能力，提高人体免疫功能。 3、保护肾上腺皮质功能，提高机体的应激能力。 4、抗肿瘤，尤其在癌切除外科手术后或采用放化疗时使用，效果显著，其最大的特点是防止癌症向肺部转移。 5、升高白细胞的作用。 * 1、采用微生物学方法，从样品土壤中培养、筛选、分离和纯化，筛选出能够应用于催化合成生物柴油的产脂肪酶菌株，所产生的脂肪酶具有较高的转酯活性并具有一定的耐短链醇能力。 2、通过菌落和菌体形态观察试验，结合16SrDNA全序列分析，确定其属种。 3、对菌株产酶发酵条件进行摸索，摇瓶培养，利用分光光度法定量表达脂肪酶活力，测定其酶活，通过单因素实验探索适合菌株生长和最佳活力的最适发酵条件，掌握该微生物的生长特点。 4、对酶进行分离纯化，利用气相色谱法测定脂肪酸甲酯含量，探讨体系的不同因素对生物柴油转酯率的影响。 * 1：配制脂肪酶活性检测培养基，用打孔器在平板上打孔后在孔中加酶液，于一定温度下放置24h。由于脂肪酶能水解相应长度脂肪酸甘油三酯，释放出脂肪酸和甘油，即在加样孔周围产生一定大小的透明圈，测量透明圈的大小可判断该酶活性大小。此种方法大多用来定性和半定量测定脂肪酶活力大小。 2：配置以对硝基苯丁酸酯为底物的反应基质溶液，取0.5mL溶液在一定温度下恒温水浴5min，然后加入50uL待测酶液，继续在该温度下保温反应10min，加入1mL95%乙醇终止反应，测定A410下的吸光度。由于脂肪酶能够水解对硝基苯丁酸酯，释放出对硝基苯酚及丁酸，对硝基苯酚在410nm有吸收峰。通过在410nm处测定释放出对硝基苯酚吸光值A410，对照“对硝基苯酚的浓度—A410标线”即可求出待测样品水解产生的对硝基苯酚的量。 Mhy-1在前10h生长迅速，10h-30h缓慢增长，30h后进入稳定期。 该菌株Mhy-1在30℃下产脂肪酶最多，在35度长势