丹参酮IIA对成骨-破骨共育体系中成骨细胞活性及IGF-ImRNA的影响.pdfVIP

丹参酮IIA 对成骨-破骨共育体系中成骨细胞活性及IGF-1mRNA 的影响 摘 要 目的：研究中药单体丹参酮 IIA 在共育体系中对成骨细胞 （Osteoblast，OB ）增殖、碱 性磷酸酶 （Alkaline phosphatase，ALP ）活性的影响，以及丹参酮IIA 对OB 表达胰岛素生 长因子-I （Insulin-like growth factor-I，IGF-I ）mRNA 表达的影响, 从细胞分子生物学水平 探讨丹参酮IIA 对骨代谢干预的可能作用途径。 方法: 1．运用琼脂糖凝胶和孔径为0.45μm 微孔滤膜建立平面式成骨细胞-破骨细胞(OB-OC) 共育体系； 2 ．采用MTT 法，PNPP 法分别检测OB 单独培养组和OB-OC 共育组的OB 增殖和ALP 活性，运用茜素红染色法分别观察两组OB 矿化情况； 3 ．通过MTT 法检测不同浓度丹参酮II 对OB 增殖的影响，了解其时效及量效关系，确定 丹参酮IIA 的最佳添加时间及添加浓度； 4 ．在共育体系中，将加入最佳添加浓度的丹参酮IIA 的培养组设为药物组，仅加完全培养 基的培养组设为空白对照组，用MTT 法、PNPP 法比较丹参酮IIA 对OB 增殖及ALP 活性的影响； 5 ．运用RT-PCR 方法检测丹参酮IIA 对OB-OC 共育体系OB 表达IGF-ImRNA 的影响。 结果： 1. 经考马斯亮蓝法检测蛋白质弥散情况，显示在8 h 内，蛋白质可以从OB 培养室经过隔 膜弥散到OC 培养室，同时，镜下观察两种细胞并未混杂，表明平面式共育体系的建立 是成功的； 2. OB 与OC 共育后，其OD 值较单独培养时明显提高( P0.01) ；OB 的ALP 活性较单独 培养组明显增强(P0.05) ；OB 矿化结节数较单独培养组大大增加( P0.01) ； 3. 丹参酮IIA 组中OB 的OD 值和ALP 活性均高于空白对照组，且OD 值成一定的时效 关系 （P0.01 ），具有统计学意义； -8 4. 10 mol/L 丹参酮IIA 对共育体系中OB 的增殖有较明显的促进作用，和其它组相比较P III 丹参酮IIA 对成骨-破骨共育体系中成骨细胞活性及IGF-1mRNA 的影响 值均小于0.05，具有统计学意义； -8 5. 在共育体系中，10 mol/L 的丹参酮IIA 组中OB 的IGF-ImRNA/β-actin 的比值则略高于 对照组 （P=0.780.05 ），无统计学意义。 结论： -8 10 mol/l 丹参酮IIA 在OB-OC 共育体系中可明显提高OB 增殖和ALP 活性，但没有 对IGF-ImRNA 的表达有明显影响，提示丹参酮IIA 是否是通过上调IGF-1mRNA 表达来影 响OB 增殖和ALP 活性还需要进一步证实研究和探讨。 关键词：成骨-破骨共育体系；成骨细胞；破骨细胞； 丹参酮IIA ；胰岛素生长因子-I II 丹参酮IIA 对成骨-破骨共育体系中成骨细胞活性及IGF-1mRNA 的影响 ABSTRACT Objectives: To investigate effects of the TanshinoneIIA on cell proliferation of osteoblast、ALP activity in the osteoblasts-osteoclasts co-culture system, and observe the expression of insulin-like growth factor-I mRNA on osteoblast with the TanshinoneIIA. Based on the experimental results, we have discussed the possible mechanism of the