急性长时间运动对大鼠心肌线粒体NO、NOS以及线粒体RCR、抑制ROS和[Ca2+]i的影响.pdfVIP

摘 要 NO 作为细胞的具有多种生物学活性的信息分子,对细胞线粒体生理功能具 有重要调节作用,如线粒体的氧化磷酸化、细胞凋亡的调控、线粒体 DNA 代谢 等。NO 生成增多可直接造成呼吸链中的复合体Ⅰ、复合体Ⅱ和丙酮酸脱氢酶等 酶蛋白功能受损 。心肌线粒体中有完整地L-Arg/NOS/NO 生成系统，现有的研 究认为心肌线粒体是心肌细胞内源性NO 产生的主要来源。由于NO 对线粒体呼 吸功能有重要作用，而心肌组织又是以有氧代谢为主的特异性组织，所以本实验 以急性长时间运动模型，观察此运动方式对大鼠心肌胞浆和线粒体NOS/NO 、线 粒体呼吸功能、线粒体中游离钙浓度、线粒体抑制活性氧 （O -·、OH .）能力的 2 变化，以初步探讨急性长时间运动状态下 NO 对心肌线粒体瞬时调控的分子机 制。 8 周龄大鼠雌性SD 大鼠12 只随机分成对照组 （6 只）和运动组 （6 只），所 有大鼠适应性游泳三天后，运动组按体重 3%负重游泳，适应 20min 捞起休息 2min ，后平均游泳299 ±29 min，立即处死取心肌线粒体测定线粒体RCR，随后 测定心肌总NOS 、mtNOS 活性，心肌三型NOSmRNA 表达水平，心肌细胞和线 粒体中NO 的含量，线粒体抑制活性氧的能力以及[Ca2+]I，结果：（1）大鼠心肌 细胞总NOS 活性运动前后比较，统计结果差异不显著 （P = 0.054 0.05 ）；大鼠 心肌线粒体总NOS 活性运动组显著低于 （P = 0.0150.05 ）。（2 ）大鼠心肌细胞 eNOSmRNA 表达水平运动前后变化不大 （P = 0.1690.05 ）；nNOSmRNA 表达水 平运动前后变化不明显 （P = 0.6940.05 ）；iNOSmRNA 表达水平运动组显著低于 对照组 （P =0.0280.05 ）。（3 ）大鼠心肌线粒体抑制 O2— ·能力运动后显著下降 （P = 0.0120.05 ）；大鼠心肌线粒体抑制? HO 能力运动后显著下降 （P = 0.0310.05 ）。（4 ）以琥珀酸为底物的大鼠线粒体呼吸态3 与呼吸态4 之比运动前 后没有变化 （P = 0.44 0.05 ）；以苹果酸为底物的大鼠线粒体呼吸态3 与呼吸态 4 之比运动前后也无变化 （P = 0.964 0.05 ）。（5 ）大鼠心肌线粒体[Ca2+]I 运动前 后变化不明显 （P = 0.10.05 ）。结论：（一）急性性长时间游泳后，大鼠心肌细胞 组成型NOSmRNA 表达水平无变化，诱导型NOSmRNA 表达水平显著下调，心 肌细胞总NOS 活性有下降趋势，mtNOS 活性显著下降，这可能是导致心肌细胞 和线粒体NO 含量显著下降的直接原因。（二）运动后，大鼠心肌线粒体的抑制 活性氧 （O2— ·，?OH）能力下降；但是运动后，大鼠心肌线粒体无论是以琥珀 酸为反应底物，还是以苹果酸为反应底物，其呼吸控制率运动前后均没有发生变 化，线粒体游离钙离子浓度虽有下降趋势，但并不显著，说明此运动方式下，心 肌线粒体功能能够保持常态，以适应运动的氧化应激。（三）由于肌线粒体 NO 水平在运动后的下调，无法和线粒体在运动过程中产生的超氧阴离子结合生成过 氧亚硝基阴离子，这可能也是线粒体呼吸功能在有活性氧产生的情况下，还保持 正常的原因。（四）根据上述结果，我们推测，一次性长时间游泳运动后，大鼠 心肌线粒体维持正常的功能状态，可能需要线粒体NO 保持一个较低的水平，这 也可能是心肌在运动应激条件下的一种保护机制。 关键词：运动，心肌，线粒体，一氧化氮，一氧化氮合酶，线粒体一氧化氮合酶， 呼吸控制率，活性氧，游离钙离子浓度 Abstract As cell’s information molecular which have a lot of biological activity, NO has important regulated effect on cell mitochondria’s physi